远离EB和紫外，检测核酸更好的选择-凝胶透射仪

互联网2013-08-27

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话说无论是初接触分子生物学的新手，还是久经考验的“老鸟”，都知道EB染料的有害性，这种有害性表现在三个方面：接触致癌性，紫外观测的诱变性，以及麻烦的后处理。但是要说到EB的替代品，好像又都不是那么合心意，比如SYBR类染料在紫外下不稳定，容易降解，一些像是GelRed之类的染料虽然毒性低，但是价格却不亲民——核酸染色成像这样的活，哪个分子生物学实验室不是每天3，4次啊。

想要避免EB的影响，又不想影响实验的效果，许多实验人员常陷入两难中，另一方面，经典的凝胶成像系统一般都是采用的紫外成像，在这种波长下，EB的灵敏度和价格都是比较合适的，而其它的染料又存在不稳定性这一瓶颈式缺点，所以导致了虽然知道EB的有害性，但许多实验室还是采用EB染料的现状。

国内生物技术自主研发著名企业：百泰克公司2009年推出了新一代的凝胶透射仪，可用于核酸和蛋白质电泳凝胶样品的观察、处理、分析和拍照。

这种凝胶透射仪：UltraPowerTM采用的是可见光光源，如果配合新一代核酸染料UltraPowerTM或者其他花菁类荧光染料，可检测出几十pg的dsDNA，灵敏度比紫外凝胶透射仪配合EB染料高10-25倍。

这是由于花菁染料具有摩尔吸收系数大和荧光量子产率高的优点，通过共轭链长度的调节，花菁的光谱可以从可见光区一直延伸到近红外区，采用红区测量可有效地排除背景干扰，获得更为理想的分析灵敏度和选择性。花菁染料的光谱对外界微环境的变化极为敏感，非常适合生物及环境样品的分析研究。

除此之外，UltraPowerTM可见光凝胶透射仪还可以用于多数荧光染料，比如SYBR Green I、绿色荧光蛋白 (EGPF)等(具体染料见附表)。这可以算得上是一套多色荧光成像分析系统，而且UltraPower可以采用普通数码相机拍照，从而摆脱了高昂造价得黑白CCD时代，可以拍出多姿多彩的电泳图片来。

UltraPowerTM可见光凝胶透射仪具体特点见下：

1. 可见光激发避免传统紫外激发时有可能对核酸样品造成的诱变和损伤，以至于克隆效率低下，甚至表达蛋白错误;

2. 实验操作安全在非紫外的可见光下操作，实验操作人员更安全，真正杜绝了紫外对人皮肤的伤害;

3. 切胶方便，不用暗箱配备本公司自主研发的特质观察镜，既可清晰地分辨电泳条带，又能彻底摆脱传统切胶回收时空间狭小，操作不便的弊端(图1);

4. 数码相机拍照，多彩亮丽拍照更简便，效果更清晰;从此告别高昂造价的黑白CCD时代，普通数码相机就可拍出多姿多彩的电泳图片来(图2);

5. 灵敏度更高和传统紫外激发的EB染色相比，该产品和配套染料的灵敏度要高出8-20倍，能检测低至0.1ul的DL2000(相当于100pg)(图3、4、5)。

图3，4 MARKER为D2000，加样量为：5μl，3μl，2μl，1μl，0.5μl，0.25μl，0.1μl(从左往右)

图5 MARKER为D2000，加样量为：1μl，0.5μl，0.25μl，0.1μl，0.05μl，0.025μl，0.01μl(从左往右)