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非蛋白氮的定量检验

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在非蛋白氮定量的检测方法中,比较常用的方法是硫酸铜沉淀法和氨基酸测定法。除此之外,本文根据非蛋白氮的组成结构的不同,采用水解蒸馏法对样品中的非蛋白氮进行检验。


  一、硫酸铜沉淀法
  根据非蛋白氮的化学性质来看,大部分溶于水,一部分在常温下不溶水,但在沸水中溶解。根据此种性质,可以先将样品煮沸,用硫酸铜将样品中的蛋白质沉淀下来,由于非蛋白氮已经溶于水,故可用过滤方法将其与样品中的蛋白质分离。在过滤时,水的温度一定不能太低,否则象双缩脲一类的物质会因为不溶于常温水而不能被过滤掉。用此种方法测定出的蛋白质含量称为样品的真蛋白质。但实际上,此种方法有很大的局限性。如果非蛋白氮不溶于沸水,或者将一般的非蛋白氮微囊化,此种方法测出的结果会与样品中的实际真蛋白有很大的差异。

 

  二、氨基酸测定法
  为了真正能够判定样品中是否掺有非蛋白氮,需测定样品中的氨基酸含量。无论采用经典的氨基酸自动分析仪分析(柱后衍生),还是采用比较快捷的HPLC分析(往前衍生),将所测定的氨基酸总量相加得到一个总氨基酸数值,然后将此数值乘以6.25为M,和用凯氏定氮法测定的粗蛋白质N相比较,M至少为N的85%(M可能略大于N)。如果低于此数值,则可以判定该样品中掺有非蛋白氮。

 

  三、水解蒸馏法
  1、原理:非蛋白氮主要包括五类:尿素及其衍生物类、氨态氮类、铵类、肽类及其衍生物、动物粪便及其它废弃物类。如果在原料中掺有氨态氮类、铵类和粪便比较容易判断(可采用硫酸铜沉淀法加镜检),一般很少将肽类及其衍生物掺入其中,剩下比较难鉴别的就是尿素及其衍生物。尿素和尿素衍生物经过强酸或强碱水解为氨盐或氨和其它的物质,在强碱的条件下可以蒸馏出氨气,原料中的蛋白质经过水解成氨基酸盐,氨基酸盐在强碱条件下稳定,从而可将非蛋白氮和真蛋白氮进行分离。

  2、仪器和设备:酒精喷灯,试管和其它常用的仪器。

  3、试剂与溶液:6mol/l的盐酸溶液和其它常用的试剂。

  4、测定方法:本文只列出用酸水解的方法。采集有代表性样品约100g,混匀后用四分法缩分出209左右,将其粉碎,使其全部通过60目样品筛。精确称取0.3000g的样品,置于容积为60ml的试管底部(注意样品勿沾在管壁上),加入30ml 6mol/l的盐酸溶液,将试管在距试管口1~2cm处用喷灯加热并封口。将封好的试管置于干燥箱内,于110℃下水解24h。冷却后打开试管,将水解液过滤至100ml容量瓶中,用蒸馏水反复多次冲洗试管和滤纸,然后定容至刻度。用10ml移液管移取10ml样液移入半微量式定氮仪的反应室中,加入20ml 1∶1的氢氧化钠溶液蒸馏10 min,余下的步骤按照测定粗蛋白的方法进行操作,得出样品所消耗的盐酸的体积为V1(ml)。同时作空白滴定可得消耗的盐酸的体积为V0,设所称样品的质量为M(g)。

  5、非蛋白氮的粗蛋白质计算公式

   CP(%)=(V1-V0)×C×O.14×6.25/M
 

(责任编辑:大汉昆仑王)
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