十分感谢!!
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对了,Na3VO4是Na3PO4吗,NaF是氟化钠吗。
还有,怎么蛋白定量(是用考马斯亮兰染色吗?)并鉴定是核蛋白
多谢!
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请教yfyu1963 :
我在稀释标记探针时遇到一个问题:我买的是单链标记的探针,需自己退火,可我不知上下游退火后,探针的浓度如何计算?例如:
上下游各为4.9nmol/OD
1. 上游:1OD 稀释成1ml,终浓度:4.9μmol/L
下游:1OD 稀释成1ml, 终浓度:4.9μmol/L
2. 取上下游各100μl,混合,退火,退火后双链探针的浓度是4.9μmol/L还是2.45μmol/L?
谢谢!
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healinghands200 wrote:
对了,Na3VO4是Na3PO4吗,NaF是氟化钠吗。
还有,怎么蛋白定量(是用考马斯亮兰染色吗?)并鉴定是核蛋白
多谢!
钒酸钠。考马斯亮兰染色行啊。据我所知只能跑电泳了,见上贴。
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adzcat wrote:
请教yfyu1963 :
我在稀释标记探针时遇到一个问题:我买的是单链标记的探针,需自己退火,可我不知上下游退火后,探针的浓度如何计算?例如:
上下游各为4.9nmol/OD
1. 上游:1OD 稀释成1ml,终浓度:4.9μmol/L
下游:1OD 稀释成1ml, 终浓度:4.9μmol/L
2. 取上下游各100μl,混合,退火,退火后双链探针的浓度是4.9μmol/L还是2.45μmol/L?
谢谢!
4。9:)
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请问yfyu1963 :
你提的蛋白浓度是多少
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1-5ug/ul
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请教yfyu1963 几个的问题
1. 带正电荷的尼龙膜有正反面吗?
2.探针能反复冻融吗?还有EMSA试剂盒中-20度保存的东西,做一次岂不就要冻融一次,会影响吗?
3. 我的凝胶是8cm×7.3cm×0.1cm的,用100V电压电泳,发现电泳速度极快,约35MIN溴酚蓝即泳至距底部1/4处,不知此电压合适不合适?
4. 每次加样都必须按说明书上的顺序吗?
非常感谢您的热心回答。
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adzcat wrote:
请教yfyu1963 几个的问题
1. 带正电荷的尼龙膜有正反面吗?
2.探针能反复冻融吗?还有EMSA试剂盒中-20度保存的东西,做一次岂不就要冻融一次,会影响吗?
3. 我的凝胶是8cm×7.3cm×0.1cm的,用100V电压电泳,发现电泳速度极快,约35MIN溴酚蓝即泳至距底部1/4处,不知此电压合适不合适?
4. 每次加样都必须按说明书上的顺序吗?
非常感谢您的热心回答。
1有的,正面标记一下
2可以啊,但肯定不大好不过没办法,你可以分装探针。盒子里那些东西我看都是不怕的,(PIERCE)
3没问题。
4没有,共有部分可以先加在一起再分,
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我做的时候,没有转染转录因子的对照也有shift的band,不知道有什麽办法解决
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你是怎么判断它是shift band?川图上来看啦
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yfyu1963您好:我是一名新手,准备作EMSA,看了您上传的图片,非常想当面向您请教学习一下该技术的相关经验,如果可以考虑的话,冒昧的请您把联系方式发到我的邮箱里:xixi76120@163.com
万分感谢!!
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xixi76120 wrote:
yfyu1963您好:我是一名新手,准备作EMSA,看了您上传的图片,非常想当面向您请教学习一下该技术的相关经验,如果可以考虑的话,冒昧的请您把联系方式发到我的邮箱里:xixi76120@163.com
万分感谢!!
呵呵,感觉象对个前辈似的,不必,我也没有太多经验的不敢当,你还是先试试做,然后有什么问题贴上来大家一起讨论我看会更好。
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yfyu1963 :
我目前准备做EMSA,检测猪的转录因子NFKB,E2F,我不想用同位素检测方法,听说化学发光法效果不错,我想请教一下:1 两者在实验操作中步骤有何大的区别么?2 化学发光法用特殊的远红外检测仪么?3 上述两种转录因子能用一个试剂盒作么?4 检测猪的转录因子与鼠和人的主要困难在哪里?需要注意点什么东东呢?
问题多了点,谢谢
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xixi76120 wrote:
yfyu1963 :
我目前准备做EMSA,检测猪的转录因子NFKB,E2F,我不想用同位素检测方法,听说化学发光法效果不错,我想请教一下:1 两者在实验操作中步骤有何大的区别么?2 化学发光法用特殊的远红外检测仪么?3 上述两种转录因子能用一个试剂盒作么?4 检测猪的转录因子与鼠和人的主要困难在哪里?需要注意点什么东东呢?
问题多了点,谢谢
1. 主要在最后一步的显影上不同,同位素的靠其放射性显影,化学发光用化学原理。但同位素要求实验条件:专门的屋子。 (责任编辑:大汉昆仑王)