微波技术在病理技术中的应用
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微波（Microwave, MW）是一种具有能量的电磁波，波长很短，仅有1mm-m间，但频率却很高，在330-300000MHZ（兆赫），由于它的频率高，可使物体内部的极性分子以每秒24.亿次的速度运动，在运动中产生瞬间热，自70年代Mayer氏首次把MW技术用于组织的固定以来，已有二十年的时间，在这时间里，人们已将MW技术广泛应用于病理技术的各个方面，如组织固定，组织脱水，组织切片的特殊染色，组织脱钙，快速组织制作，免疫组化染色等。
（一）组织固定
组织固定的目的是使组织细胞中的蛋白质发生凝固，以保存组织中原有的微细结构。以往为了达到上述的目的，常应用许多常规试剂来固定组织，如甲醛和酒精等。但是，由于这些固定液的穿透性不强，因而固定需时较长，致使某些抗原成分的丧失，虽然人们应用新鲜的组织来制作切片，以利于研究，但这样手续极为麻烦，且病例有限，做不了回顾性研究。基于上述原因，人们为了更好地保存抗原，研究了不同的各种固定组织的方法，在这些方法中，MW技术固定的组织、抗原保存较好。
1．MW技术固定各种组织所需的温度
MW是具有能量的电磁波，由于它能使物体内部的极性分子快速运动而产热，那么应用于组织固定的温度应是多少为好呢？各种组织由于各自的结构不同，分子不一，电子密度也就不一样，因而用于组织固定的温度也不一样。Bernard经过一系列的实验，认为肝、肾、肺的最佳固定温度是70℃，77℃和77℃，我们的实验认为各组织的固定温度应在60℃左右，时间2-3min为好。
2．MW技术固定是组织所需固定液的选择
本室张素娟应用临床冰冻切片所剩的新鲜组织如甲状腺、乳腺、淋巴结等组织，实验性小鼠的肝、肾、心、肺和大肠等组织，分别用甲醛、生理盐水进行固定，然后通过HE、网染、AB-PAS等特殊染色以及用免疫组化对几种抗体如CEA、EMA和L26等的标记，对其结果进行比较，结果发现生理盐水固定的组织效果最好。我们的实验也证明生理盐水固定的组织效果为最好，但应注意的是固定组织块不能太厚，时间在3min左右。
3．MW技术固定组织固定液的选择
固定液的量按传统的固定方法，应是1：20，但在固定液也不能很少，至少不少于250ml。原因之一，液体量少，容易导致沸腾，如此易使液体挥发直至干涸，使组织块破坏严重。其二是液体量多，可保持一定的温度，接受全程的MW辐射，使辐射和固定足时，使固定完全彻底。
（二）MW快速石蜡制作法
新鲜组织或临床门诊病例的组织（存于福尔马林固定液中）采用本法的以下列为好：
1．福尔马林（或生理盐水）MW辐射1.30-2.30min；
2．80%酒精MW1.30-2.30min；
3．90%酒精MW1.30-2.30min；
4．95%酒精MW1.30-2.30min；
5．95%酒精MW1.30-2.30min；
6．100%酒精MW1.30-2.30min；
7．100%酒精MW1.30-2.30min；
8．二甲苯MW1.30-2.30min；
9．浸蜡15-20min左右。
应用MW技术快速石蜡切片，必须注意的问题：
1．如果组织送至病理科时已用福尔马林固定液浸泡，则固定液仍采用福尔马林固定液，如为新鲜组织，可用生理盐水固定。
2．脱水剂采用由低至高浓度的酒精，以减少组织的过度收缩。
3．如果采用丙酮作脱水剂，应注意组织的收缩，因丙酮的沸点低，在MWO内容易沸腾。
4．脱水剂的量应在200-250ml间，过少容易使液体沸腾直至干涸，过多则达不到所需的温度，影响脱水效果。
5．如需在MWO内浸蜡，应注意脱水盒上的金属片，因为MWO内不能用金属等物品。
（三）MW技术的特殊染色法
特殊染色法中，有许多方法中的浸染时间，少则几秒种，多则几十个小时，下面是几种特殊染色的时间比较。
项目/时间 室温浸染时间（min） MW辐射时间（min）
Grocott六胺银 70 1.5
胶性银AgNOR 40 1.5
胶性角-AB 40,40 1.5,1.0
PAS-胶性银 30,40 1.0,1.5
（四）MW技术脱钙法
将骨组织锯成小块，取一烧杯，盛100ml左右的10%硝酸，在其液面上加入20ml左右的液体石蜡，然后于MWO辐射10min左右，直至用大头针能顺利扎入为止。
应用MW技术进行骨组织脱钙，既要使组织快速脱钙，又要不使硝酸腐蚀机器，就必须注意如下问题：
1．液体不能过少，否则易沸腾导致硝酸溅洒出来。
2．液面上加上液体石蜡，以使硝酸分子溅洒出来，同时在MWO内加2杯冷水或冰块，以吸收一些热量，使温度不会过高。
（五）MW技术的免疫组化染色法
各种免疫组织化学的方法如ABC、LSAB（SP）、EV二步法等，都能用MW技术来进行，在应用MW技术时，必须注意如下问题：
1．MW辐射的时间：作为MW技术进行免疫组化染色，其辐射时间各有不同，这应看所使用的MWO型号及其功率，大功率的时间应相对较少。
2．MW辐射的温度：应用的MWO如为家用MWO，其温度将不好控制，MW技术免疫组化染色，温度过高，将会导致染色的失败。免疫组化加入的抗体，最多为100μl（这如果用手工操作，至少可作3例）当温度过高时，抗体很容易被蒸发至干涸，此时应在MWO内放置一些冰块或用三角烧杯或瓶装的冷水，以吸收MW辐射产生的热量，使染色能顺利进行，一旦加入抗体被热量所蒸发干涸，染色将告失败，应重新切片，决不能使用干涸的切片，因这种切片的抗原已失活。
3．MWO内禁用一切从属和从属性的东西，否则容易操坏 仪器 。
（一）组织固定
组织固定的目的是使组织细胞中的蛋白质发生凝固，以保存组织中原有的微细结构。以往为了达到上述的目的，常应用许多常规试剂来固定组织，如甲醛和酒精等。但是，由于这些固定液的穿透性不强，因而固定需时较长，致使某些抗原成分的丧失，虽然人们应用新鲜的组织来制作切片，以利于研究，但这样手续极为麻烦，且病例有限，做不了回顾性研究。基于上述原因，人们为了更好地保存抗原，研究了不同的各种固定组织的方法，在这些方法中，MW技术固定的组织、抗原保存较好。
1．MW技术固定各种组织所需的温度
MW是具有能量的电磁波，由于它能使物体内部的极性分子快速运动而产热，那么应用于组织固定的温度应是多少为好呢？各种组织由于各自的结构不同，分子不一，电子密度也就不一样，因而用于组织固定的温度也不一样。Bernard经过一系列的实验，认为肝、肾、肺的最佳固定温度是70℃，77℃和77℃，我们的实验认为各组织的固定温度应在60℃左右，时间2-3min为好。
2．MW技术固定是组织所需固定液的选择
本室张素娟应用临床冰冻切片所剩的新鲜组织如甲状腺、乳腺、淋巴结等组织，实验性小鼠的肝、肾、心、肺和大肠等组织，分别用甲醛、生理盐水进行固定，然后通过HE、网染、AB-PAS等特殊染色以及用免疫组化对几种抗体如CEA、EMA和L26等的标记，对其结果进行比较，结果发现生理盐水固定的组织效果最好。我们的实验也证明生理盐水固定的组织效果为最好，但应注意的是固定组织块不能太厚，时间在3min左右。
3．MW技术固定组织固定液的选择
固定液的量按传统的固定方法，应是1：20，但在固定液也不能很少，至少不少于250ml。原因之一，液体量少，容易导致沸腾，如此易使液体挥发直至干涸，使组织块破坏严重。其二是液体量多，可保持一定的温度，接受全程的MW辐射，使辐射和固定足时，使固定完全彻底。
（二）MW快速石蜡制作法
新鲜组织或临床门诊病例的组织（存于福尔马林固定液中）采用本法的以下列为好：
1．福尔马林（或生理盐水）MW辐射1.30-2.30min；
2．80%酒精MW1.30-2.30min；
3．90%酒精MW1.30-2.30min；
4．95%酒精MW1.30-2.30min；
5．95%酒精MW1.30-2.30min；
6．100%酒精MW1.30-2.30min；
7．100%酒精MW1.30-2.30min；
8．二甲苯MW1.30-2.30min；
9．浸蜡15-20min左右。
应用MW技术快速石蜡切片，必须注意的问题：
1．如果组织送至病理科时已用福尔马林固定液浸泡，则固定液仍采用福尔马林固定液，如为新鲜组织，可用生理盐水固定。
2．脱水剂采用由低至高浓度的酒精，以减少组织的过度收缩。
3．如果采用丙酮作脱水剂，应注意组织的收缩，因丙酮的沸点低，在MWO内容易沸腾。
4．脱水剂的量应在200-250ml间，过少容易使液体沸腾直至干涸，过多则达不到所需的温度，影响脱水效果。
5．如需在MWO内浸蜡，应注意脱水盒上的金属片，因为MWO内不能用金属等物品。
（三）MW技术的特殊染色法
特殊染色法中，有许多方法中的浸染时间，少则几秒种，多则几十个小时，下面是几种特殊染色的时间比较。
项目/时间 室温浸染时间（min） MW辐射时间（min）
Grocott六胺银 70 1.5
胶性银AgNOR 40 1.5
胶性角-AB 40,40 1.5,1.0
PAS-胶性银 30,40 1.0,1.5
（四）MW技术脱钙法
将骨组织锯成小块，取一烧杯，盛100ml左右的10%硝酸，在其液面上加入20ml左右的液体石蜡，然后于MWO辐射10min左右，直至用大头针能顺利扎入为止。
应用MW技术进行骨组织脱钙，既要使组织快速脱钙，又要不使硝酸腐蚀机器，就必须注意如下问题：
1．液体不能过少，否则易沸腾导致硝酸溅洒出来。
2．液面上加上液体石蜡，以使硝酸分子溅洒出来，同时在MWO内加2杯冷水或冰块，以吸收一些热量，使温度不会过高。
（五）MW技术的免疫组化染色法
各种免疫组织化学的方法如ABC、LSAB（SP）、EV二步法等，都能用MW技术来进行，在应用MW技术时，必须注意如下问题：
1．MW辐射的时间：作为MW技术进行免疫组化染色，其辐射时间各有不同，这应看所使用的MWO型号及其功率，大功率的时间应相对较少。
2．MW辐射的温度：应用的MWO如为家用MWO，其温度将不好控制，MW技术免疫组化染色，温度过高，将会导致染色的失败。免疫组化加入的抗体，最多为100μl（这如果用手工操作，至少可作3例）当温度过高时，抗体很容易被蒸发至干涸，此时应在MWO内放置一些冰块或用三角烧杯或瓶装的冷水，以吸收MW辐射产生的热量，使染色能顺利进行，一旦加入抗体被热量所蒸发干涸，染色将告失败，应重新切片，决不能使用干涸的切片，因这种切片的抗原已失活。
3．MWO内禁用一切从属和从属性的东西，否则容易操坏 仪器 。
