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病毒感染检查方法(形态学观察与免疫学诊断)

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一、病毒感染后的形态学观察
(一)电镜观察病毒的形态
电子显微镜技术可直接观察病毒的大小、形态、结构以及病毒在细胞内增殖的动态过程。制作电镜标本的方法主要有超薄切片(厚度为100nm左右),磷钨酸负染法等。
通过观看病毒的电镜照片、幻灯片、多媒体,了解病毒(大肠杆菌噬菌体、流感病毒、腺病毒、脊髓灰质炎病毒、乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、狂犬病病毒等)的形态结构特点,以及它们与被感染细胞的关系。
(二)病毒包涵体的观察
某些受病毒感染的细胞内,可形成与正常细胞结构和着色不同的斑块,称为包涵体。应用光学显微镜检查包涵体,根据不同病毒包涵体的形态、染色、存在部位的差异,可辅助诊断某些病毒性疾病。
1、狂犬病毒包涵体(内基小体,Negri body)
取狂犬海马部位神经组织病理切片,苏木精-伊红染色,置光镜下观察。
镜下特点:神经细胞染成蓝色,间质为粉红色,在神经细胞浆内可见一个或数个、圆形或椭圆形、染成红色的内基小体。注意包涵体形态、存在部位及染色特点。
2、麻疹病毒包涵体
将麻疹病毒接种于人胚肾或羊膜细胞中,取培养后的组织细胞涂片,HE染色,置光镜下观察。
镜下特点:细胞呈多核巨细胞病变,多核巨细胞的核及核仁呈蓝色,胞浆淡红色,在核内及胞浆内皆可找到一个或多个鲜红色的园形、椭园形或不规则形态的包涵体。注意包涵体形态、存在部位及染色特点。
二、病毒的培养方法
病毒因结构简单,不能单独进行物质代谢,必须在易感的活细胞中寄生,由宿主细胞供给其合成的原料、能量与场所才能增殖。
常用的病毒培养方法有动物接种、鸡胚培养及组织(细胞)培养三种。目前组织(细胞)培养法已得到广泛应用。
(一)动物接种法
 动物接种是分离病毒较早应用的方法,本法在分离病毒方面,现多数已被组织培养法所取代,但在某些对其敏感性强的病毒的分离,或科学研究需要制作"动物模型"方面,至今仍有其重要性。此法有两个缺点:① 动物本身可能带有病毒;② 许多病毒受种属特异性限制。
分离病毒常用的动物有小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔及猴子等。接种时要根据病毒对动物及组织细胞的亲嗜性而选择特定的部位,如鼻腔、皮内、皮下、腹腔、脑内、静脉等。试验动物在病毒学研究中的用途主要有:分离与鉴定病毒、制备疫苗及诊断抗原、制备免疫血清、研究病毒的致病性、免疫性、发病机理及有效药物疗法等
小白鼠脑内接种法
【材料】
脑炎病毒(小白鼠脑脊髓炎)悬液:感染病毒的脑组织先用无菌生理盐水洗去血液,再加100%脱脂奶水研磨成10毫升悬液,然后用3000转/分离心沉淀30分钟,吸取上清液供接种用。
小白鼠:3周龄,体重6-8克。
注射器、碘酒、消毒液、纱布等。
【方法】
1、1毫升注射器抽取脑炎病毒悬液0.1毫升,去除注射器内的气泡。
2、取出小白鼠,左手将小白鼠固定,固定时用大拇指和食指握住小白鼠的头部,左手掌轻轻按住小白鼠的体部。
3、右手以棉签蘸以碘酒,消毒小白鼠的右颞部皮毛(不碰到眼)。
4、右手拿注射器在小白鼠眼与耳根连线的中点略偏耳朵的方向进入颅腔,进针2-3mm,不要插得太深,注射量为0.02-0.03ml。
5、注射完毕,碘酒消毒注射局部,将小鼠放回笼中,室温隔离饲养。逐日观察动物发病情况,动物一般在3-4天开始发病,食欲减退,活动迟纯、耸毛、振颤、痉挛,慢慢发展为麻痹瘫痪而死亡。
本法适用于一切脑炎病毒的分离培养之用。

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