细胞融合与培养细胞的形态观察和计数

【实验目的】
1.掌握相差显微镜的使用。
2.掌握培养细胞的计数方法。
3.掌握细胞融合的实验方法及融合率的计算。
4.熟悉体外培养细胞的形态和生长状态的观察和判定方法。

【理论基础】
主要联系理论课“细胞的研究方法”一章的相关内容。
1.细胞融合技术
基本概念
杂交细胞的基本概念：具有两个细胞的特性
常用的促融方法：PEG、仙台病毒、电穿孔
主要应用：基因定位、单克隆抗体制备等
2.体外培养的细胞的两种状态(贴壁型细胞和悬浮型细胞)

【实验内容】
（一）细胞融合
[操作技能要求]
1.熟悉PEG方法进行细胞融合的基本过程
2.学会计算融合率
[讲解和明确的内容]
1.细胞融合的基本概念
2.细胞融合常用诱导剂的种类和特点
3.细胞融合的主要应用
4.影响本实验细胞融合率的主要因素（PEG分子量的大小、加入PEG的持续时间、PEG的温度等）
5.实验各步加入hanks液的作用
[注意事项]
1.PEG在加热后遇冷极易凝固，加热前应充分准备好后再加热，加热融化后应置于水浴中
2.在向细胞中加入PEG时，应注意掌握合适的温度，防止PEG过热损伤细胞
[观察要点]
1.注意观察两个或两个以上的鸡血红细胞融合的形态
2.注意区分重叠的红细胞。

（二）培养细胞的观察与计数
[操作技能要求]
1.学会实验细胞计数板计数细胞
2.学会使用 倒置显微镜 观察培养细胞
3.熟悉培养细胞生长状态的判定标准
[讲解和明确的内容]
1.贴壁型细胞和悬浮型细胞的的形态特点
2.判断培养细胞状态好坏的标准
3. 细胞计数 板的构造
4. 细胞计数 的原则（压线者数上不数下，数左不数右）
[观察要点] 注意观察培养细胞的形状和状态