影响转染实验的因素
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1958
转染技术是指将外源分子如DNA，RNA 等导入真核细胞的技术。随着分子
生物
学和细胞生 物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因 功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等
生物
学试验中，其应用越来越广泛。影响转 染效率的因素有很多，细胞株本身的特性和活性，
细胞培养
条件，转染的DNA 或RNA 的质量， 转染方法，转染试剂的选择等。
常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源 DNA/RNA 不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表 达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA 转染效率较高，在转染后24-72 小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些 报告系统如荧光蛋白，β - 半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染，外源DNA 既可 以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体（episome）存在。尽管线性DNA 比超螺旋DNA 转入量低但整合率高。外源DNA 整合到染色体中概率很小，大约1/104 转染细胞能整合， 通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B 磷 酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。
转染效率受多种因素影响，主要因素有下面几个：
1．转染试剂
不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染 实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成 功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适 合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。
2．细胞状态
一般低的细胞代数（<50）能确保基因型不变。最适合转染的细胞是经过几次传代后 达到指数生长期的细胞，细胞生长旺盛，最容易转染。 细胞培养 在 实验室中保存数月和数年 后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演化。这会导致和转染相关的细胞行为的 变化。也就是说同一种系的细胞株，在各实验室不同培养条件下，其生物学性状发生不同程 度的改变，导致其转染特性也发生变化。因此，如果发现转染效率降低，可以试着转染新鲜 培养的细胞以恢复最佳结果。
3．转染方法
不同转染 试剂 有不同的转染方法，但大多大同小异。转染时应跟据具体转染 试剂 推荐 的方法，但也要注意，因不同实验室培养的细胞性质不同，质粒定量差异，操作手法上的差 异等，其转染效果可能不同，应根据实验室的具体条件来确定最佳转染条件。
（1） 细胞培养 物
健康的 细胞培养 物是成功转染的基础。不同细胞有不同的培养基， 血清 和添加物。高 的转染效率需要一定的细胞密度，一般的转染试剂都会有专门的说明。推荐在转染前24 小 时分细胞，这将提供正常细胞代谢，增加对外源DNA 摄入的可能。一定要避免细菌，支原体 或真菌的污染。
（2）细胞密度
细胞密度对转染效率有一定的影响。不同的转染试剂，要求转染时的最适细胞密度各 不相同，即使同一种试剂，也会因不同的细胞类型或应用而异。转染时过高或者过低的细胞 密度会导致转染效率降低，乃至表达水平偏低。因此如果选用新的细胞系或者新的转染试剂， 最好能够进行优化实验并为以后的实验建立一个稳定方法，包括适当的接种量和培养时间等 等。阳离子脂质体具有微量的细胞毒性而往往需要更高的铺板密度或者更多的悬浮细胞数， 有的要求细胞90%汇片；而有些多胺或者非脂质体的配方则要求在40%-80%之间，总之是尽 量在细胞最适的生理状态下转染，以求最佳的转染效果。不同的实验目的也会影响转染时的 铺板密度，比如研究细胞周期相关基因等表达周期长的基因，就需要较低的铺板密度，所以 需要选择能够在较低铺板密度下进行转染的试剂。一般转染时贴壁细胞密度为50%-90%，但 这个需要参考所选转染试剂的说明书。
常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源 DNA/RNA 不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表 达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA 转染效率较高，在转染后24-72 小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些 报告系统如荧光蛋白，β - 半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染，外源DNA 既可 以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体（episome）存在。尽管线性DNA 比超螺旋DNA 转入量低但整合率高。外源DNA 整合到染色体中概率很小，大约1/104 转染细胞能整合， 通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B 磷 酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。
转染效率受多种因素影响，主要因素有下面几个：
1．转染试剂
不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染 实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成 功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适 合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。
2．细胞状态
一般低的细胞代数（<50）能确保基因型不变。最适合转染的细胞是经过几次传代后 达到指数生长期的细胞，细胞生长旺盛，最容易转染。 细胞培养 在 实验室中保存数月和数年 后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演化。这会导致和转染相关的细胞行为的 变化。也就是说同一种系的细胞株，在各实验室不同培养条件下，其生物学性状发生不同程 度的改变，导致其转染特性也发生变化。因此，如果发现转染效率降低，可以试着转染新鲜 培养的细胞以恢复最佳结果。
3．转染方法
不同转染 试剂 有不同的转染方法，但大多大同小异。转染时应跟据具体转染 试剂 推荐 的方法，但也要注意，因不同实验室培养的细胞性质不同，质粒定量差异，操作手法上的差 异等，其转染效果可能不同，应根据实验室的具体条件来确定最佳转染条件。
（1） 细胞培养 物
健康的 细胞培养 物是成功转染的基础。不同细胞有不同的培养基， 血清 和添加物。高 的转染效率需要一定的细胞密度，一般的转染试剂都会有专门的说明。推荐在转染前24 小 时分细胞，这将提供正常细胞代谢，增加对外源DNA 摄入的可能。一定要避免细菌，支原体 或真菌的污染。
（2）细胞密度
细胞密度对转染效率有一定的影响。不同的转染试剂，要求转染时的最适细胞密度各 不相同，即使同一种试剂，也会因不同的细胞类型或应用而异。转染时过高或者过低的细胞 密度会导致转染效率降低，乃至表达水平偏低。因此如果选用新的细胞系或者新的转染试剂， 最好能够进行优化实验并为以后的实验建立一个稳定方法，包括适当的接种量和培养时间等 等。阳离子脂质体具有微量的细胞毒性而往往需要更高的铺板密度或者更多的悬浮细胞数， 有的要求细胞90%汇片；而有些多胺或者非脂质体的配方则要求在40%-80%之间，总之是尽 量在细胞最适的生理状态下转染，以求最佳的转染效果。不同的实验目的也会影响转染时的 铺板密度，比如研究细胞周期相关基因等表达周期长的基因，就需要较低的铺板密度，所以 需要选择能够在较低铺板密度下进行转染的试剂。一般转染时贴壁细胞密度为50%-90%，但 这个需要参考所选转染试剂的说明书。
