植物有丝分裂临时制片(压片法)

一、实验目的：学习醋酸洋红染色的具体操作方法，观察植物根尖的细胞有丝分裂各个时期染色体的变化及特征。
二、实验原理（有丝分裂过程同实验一）
三、实验材料 蚕豆根尖（2n=12）
四、实验步骤
1、取材：蚕豆根尖
先将种子浸泡1天，待吸水膨胀后移到铺有几层吸水纸的培养皿内，上面盖两层湿纱布加不少许，置于18-20℃（黑暗）培养40-50小时。待根长至1-2cm时，于上午10时左右剪取。

2、预处理：目的，使获得中期分裂相较多的细胞，使染色体缩短，分散，便于压片观察。
预处理机理：阻止或破坏纺纺锤体微管的形成，使有丝分裂过程被抑制在分裂中期阶段，以便累积较多的处于分裂中期的分裂相；导致chr高度浓缩、变短，利于chr的分散。
方法1:冷冻处理
根尖放入盛 蒸馏 水的指形管中，置于冰水共存的冰瓶中，然后把冰瓶放到0—3℃的冰箱中处理24小时。染色体数较多的实验材料可适延长时间（20—40小时），但需注意勿使材料结冰。
方法2:药剂处理
a.0.01-0.2%秋水仙素溶液处理2-4h
b.对二氯苯饱和水溶液处理3-4h
c.100ml对二氯苯饱和水溶液加1-2滴α-溴萘处理3-4h
d.0.002M8-羟基喹啉处理3-4h
药剂处理时温度不能过高,以10-15℃为宜。
3、固定

冲洗干净处理的材料 卡诺氏液（冰乙酸：无水乙醇=1：3或冰乙酸：氯仿：无水乙醇=1；3：6）固定24h
可立即使用
不立即使用，置于95%酒精30min后 置入80%酒精中30min 70%酒精。4℃下保存，若保存时间较长需要重新固定后再用。
以上三步实验员已做，我们从第4步开始做。
4、解离
1）从从培养皿里取出4-5条根置于表面皿中，用 蒸馏 水冲洗3-4次（废水入塑料杯）。。
2）根洗净后，加入数滴1N盐酸于表面皿中，以浸泡住根为准。
3）用镊子夹住表面皿边缘在酒精灯上间歇式加热2-4分钟（发现盐酸溶液有气泡冒出时，立即远离火焰），用镊子尖夹根是否已经变软，若变软，则说明已解离好，否则继续解离。（乳白色，经解离，变化为透明状）。
5、染色
1）将解离好的根用蒸馏水冲洗干净后，加几滴醋酸洋红于表面皿内，在灯上加热，注意来回快速往返或加热的同时，不要加热到沸腾状态，若沸腾马上停止加热。（增加根染色程度）
2）取一根已染过色的根放在载玻片上，用镊子夹取根尖1.5mm长度处，加一滴醋酸洋红染料，在火焰上来回烤几下。
3）再加一滴1%的醋酸洋红溶液，盖上盖玻片用解剖针的反头垂直轻敲盖玻片，使根尖压成一薄层。（多余的染料用纸吸干）。
压片时注意不要再移盖片，否则会造成更多细胞生重叠。反复加醋酸洋红染料->加热-敲片，最后形成薄雾状。
6、镜检
先在10X，找到分裂相后再换40倍X观察，并绘图。
五、分析结果
1、制出几张好片子，当堂验收，观察到明显的中期等分裂相。进行绘图，加以文字说明。
2、对实验过程中出现的各种问题进行分析和讨论。