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植物有丝分裂临时制片(压片法)

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一、实验目的:学习醋酸洋红染色的具体操作方法,观察植物根尖的细胞有丝分裂各个时期染色体的变化及特征。
二、实验原理(有丝分裂过程同实验一)
三、实验材料 蚕豆根尖(2n=12)
四、实验步骤
1、取材:蚕豆根尖
先将种子浸泡1天,待吸水膨胀后移到铺有几层吸水纸的培养皿内,上面盖两层湿纱布加不少许,置于18-20℃(黑暗)培养40-50小时。待根长至1-2cm时,于上午10时左右剪取。

2、预处理:目的,使获得中期分裂相较多的细胞,使染色体缩短,分散,便于压片观察。
预处理机理:阻止或破坏纺纺锤体微管的形成,使有丝分裂过程被抑制在分裂中期阶段,以便累积较多的处于分裂中期的分裂相;导致chr高度浓缩、变短,利于chr的分散。
方法1:冷冻处理
根尖放入盛 蒸馏 水的指形管中,置于冰水共存的冰瓶中,然后把冰瓶放到0—3℃的冰箱中处理24小时。染色体数较多的实验材料可适延长时间(20—40小时),但需注意勿使材料结冰。
方法2:药剂处理
a.0.01-0.2%秋水仙素溶液处理2-4h
b.对二氯苯饱和水溶液处理3-4h
c.100ml对二氯苯饱和水溶液加1-2滴α-溴萘处理3-4h
d.0.002M8-羟基喹啉处理3-4h
药剂处理时温度不能过高,以10-15℃为宜。
3、固定

冲洗干净处理的材料 卡诺氏液(冰乙酸:无水乙醇=1:3或冰乙酸:氯仿:无水乙醇=1;3:6)固定24h
可立即使用
不立即使用,置于95%酒精30min后 置入80%酒精中30min 70%酒精。4℃下保存,若保存时间较长需要重新固定后再用。
以上三步实验员已做,我们从第4步开始做。
4、解离
1)从从培养皿里取出4-5条根置于表面皿中,用 蒸馏 水冲洗3-4次(废水入塑料杯)。。
2)根洗净后,加入数滴1N盐酸于表面皿中,以浸泡住根为准。
3)用镊子夹住表面皿边缘在酒精灯上间歇式加热2-4分钟(发现盐酸溶液有气泡冒出时,立即远离火焰),用镊子尖夹根是否已经变软,若变软,则说明已解离好,否则继续解离。(乳白色,经解离,变化为透明状)。
5、染色
1)将解离好的根用蒸馏水冲洗干净后,加几滴醋酸洋红于表面皿内,在灯上加热,注意来回快速往返或加热的同时,不要加热到沸腾状态,若沸腾马上停止加热。(增加根染色程度)
2)取一根已染过色的根放在载玻片上,用镊子夹取根尖1.5mm长度处,加一滴醋酸洋红染料,在火焰上来回烤几下。
3)再加一滴1%的醋酸洋红溶液,盖上盖玻片用解剖针的反头垂直轻敲盖玻片,使根尖压成一薄层。(多余的染料用纸吸干)。
压片时注意不要再移盖片,否则会造成更多细胞生重叠。反复加醋酸洋红染料->加热-敲片,最后形成薄雾状。
6、镜检
先在10X,找到分裂相后再换40倍X观察,并绘图。
五、分析结果
1、制出几张好片子,当堂验收,观察到明显的中期等分裂相。进行绘图,加以文字说明。
2、对实验过程中出现的各种问题进行分析和讨论。
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