物理、化学因素对染色体的影响

一、实验目的
1、了解物理化学因素对染色体的诱变作用；
2、理解植物材料经物理化学因素诱变处理原理；
3、掌握物理化学因素诱变处理的染色体装片的制作、分析方法。
二、实验原理
    物理、化学因素对染色体有诱变作用，如紫外线、电离辐射、多种化学诱变剂可以引起染色体畸变。在细胞学上观察可见双着丝粒的桥和断片，微核等的产生，并且产生的量与诱变剂量呈正比。
三、实验材料
蚕豆
四、器具及药品
    电子天平，恒温 水浴 锅，恒温培养箱，手提式紫外灯，显微镜，解剖器，载玻片，盖玻片，白瓷盘，烧杯，甲醇，冰乙酸，盐酸，叠氮化钠，甲基磺酸乙酯，卡保品红。
五、实验步骤
㈠常规发芽
将蚕豆种子洗净，加入50℃的温水浸泡一天，然后转入垫有湿润吸水纸的白瓷盘中，置25℃温箱中发芽，种子幼根长至1-2cm时，进行如下处理。
㈡物理化学因素处理
物理：放在紫外灯下照射1-2小时，
化学：加入叠氮钠溶液培养5小时或甲基磺酸乙酯培养5小时。
叠氮钠溶液浓度：0.2、0.4、0.8、1mmol/l，
甲基磺酸乙酯浓度：50、100、150、200mmol/l
对照：自来水
㈢恢复培养
    换入自来水恢复培养5-8小时。
㈣固定
投入甲醇—冰醋酸（３：１）固定液固定2－２４h。
㈤解离
从固定液中取出蚕豆根尖，用蒸馏水漂洗，再放到1mol/LHCl 中，在60℃ 水浴 中解离8—12 分钟，用 蒸馏 水漂洗干净。
㈥染色
将根尖放在载玻片上，加上2滴卡宝品红染色液染色。
㈦压片
把染色好的根尖用解剖针把根冠及延长区部分截去，并盖上盖玻片，用镊子尖轻轻的敲打盖玻片，再覆以吸水纸用大拇指均匀加压，使材料分开，并吸去多余染料。
㈧镜检观察
六、作业
填写表格，并计算畸变率。
染色体畸变和微核的观察统计

根	桥	断片	桥+断片	正常的中后期细胞数	微核数	总畸变率
1
2
3
4
…
20
总计