凝集反应(agglutination reaction)实验

当颗粒性抗原与其相应抗血清混合时，在有一定浓度的电解质环境中，抗原凝集成大小不等的凝集块，叫做凝集反应。
凝集反应广泛地应用于疾病的诊断和各种抗原性质的分析。即可用已知免疫血清来检查未知抗原，亦可用已知抗原检测特异性抗体。
一．直接凝集反应
颗粒抗原与抗体直接结合出现凝集现象叫直接凝集反应。
（一）玻片凝集反应
材料：
1．诊断血清：1：10稀释的伤寒杆菌诊断血清
2．菌种：伤寒杆菌、痢疾杆菌24小时琼脂斜面培养物
3．生理盐水、载玻片、毛细吸管
方法：
1．取清洁玻片一张，用蜡笔划为三格，并注明号码。无菌操作下，用接种环于1、2格内加1：10稀释伤寒杆菌诊断血清1-2滴，第三格加1-2滴生理盐水。
2．无菌操作下，用接种环取伤寒杆菌培养物少许，混于第三格中，再混于第一格中（不能先混第一格再混第三格，因为这样将使诊断血清混入盐水而影响对照结果），将细菌与盐水或血清混合均匀使呈乳状液。此时取菌量不可过多，使悬液呈轻度乳浊即可。
3．同法取枯草杆菌培养物少许，于第二格内混匀。
4．轻轻摇动玻片，经1-2分钟后肉眼观察，出现乳白色凝集块者，即为阳性反应；仍为平等的乳浊液者，即为阴性反应。如结果不够清晰，可将玻片放于低倍显微镜下观察。
（二） 试管 凝集反应
为一种定量试验，用已知抗原检查血清中有无特异抗体，并测定其相对含量。
材料：
1．诊断血清1：10稀释伤寒杆菌“H”血清，1：10稀释伤寒杆菌“O”血清。
2．菌液：伤寒杆菌“H”菌液，伤寒杆菌“O” 菌液。
3．生理盐水，小 试管 ，吸管。
方法：
1．取洁净小试管14只分两排排列于试管架上，每排7只依次用蜡笔注明号码，于每管中分别加入0.5毫升生理盐水。
2．在第1排1管中加入1：10稀释伤寒H血清0.5毫升，于管内连续吹吸3次，使血清与盐水充分混合，而后吸出0.5毫升注入第2管，同样予以混匀后吸出0.5毫升注入第3管。依次类推，稀释到第6管，自第6管吸出0.5毫升弃去。此时，自第1管至第6管的血清稀释倍数为1：20，1：40，1：80，1：160，1：320，1：640。第7管不加血清作为对照。
3．同法用吸管吸取1：10稀释伤寒杆菌O血清加入第2排第1管，并依次如上法予以稀释。
4．用移液管吸取伤寒杆菌H菌液，加收第1排各管中每管0.5毫升（由盐水对照管开始，依次由后向前加入）此时血清稀释倍数又增加了一倍。
5．同法于第2排各管中加入伤寒O菌液0.5毫升。
6．将各管振荡混匀，放37℃ 水浴 箱中2—4小时或37℃孵育箱中过夜次日取出观察
结果。
观察结果：
1．观察切勿摇动试管，以免凝集块分散。
2．先看对照管，此管应无凝集现象，管内液体仍成混浊状态。但如放置时间较长，细菌堆于管底成小圆点状，为阴性反应。
3．试验管应自第1管看起，如有凝集时则于管底有不同大小的圆片状边缘不整齐的凝集物，上清则澄清透明或不同程度混浊。凝集的强弱可用“+”号表示如下：
“++++”凝集很强，管内液体完全澄清，凝集块完全沉于管底；
“+++”凝集强，管内液体不完全澄清稍有轻度混浊，凝集块沉于管‍底；
“++”凝集中等强度，液体半澄清，凝集块沉于管底；
“+”凝集弱，管内液体混浊，少量凝集块沉于管底；
“－”不凝集，管内液体和对照管同样混浊，无凝集块。
4．轻轻振荡各管，观察凝集块的状态，对照管的细菌在振荡时呈烟雾状上升，随即消散，细菌分散仍呈混浊状态。“H”菌液的凝集块疏松呈棉状，大片沉于管底轻摇即升起，并极易破碎。“O”菌液凝集呈紧密颗粒状，沉于管底坚实致密，轻轻振摇不易升起，凝集颗粒较小不易摇碎。
5．记录观察的结果并制定凝集效价。通常以能产生明显凝集（++）的血清大稀释倍数作为该血清的凝集效价。如血清的最低稀释度（即第1管1：40）仍无凝集应报告为低于1：40。如血清的最高稀释度（即第6管1：1280）仍显完全凝集现象。，应报该血清效价高于1：1280。