动物细胞融合技术

1 动物细胞融合方法 :

1.1 病毒诱导融合
      灭活的仙台病毒可诱发细胞融合成多核体细胞。
        一般过程：

1.2  化学诱导融合
方法：类似植物细胞融合的PEG法。
特点：来源方便、使用简便、活性稳定、融合效率高
     由于动物细胞pH值多为中性至弱碱性,PEG溶液的pH值应调至7.4~8.0为宜。
 
1.3  电激诱导融合
方法：类似植物原生质体电激融合。
优点：操作简单；适用于各种细胞类型; 不需加外源因子如PEG等;对细胞的毒性相对低;融合率很高;可用于细胞数量很少的融合过程;可在显微镜直视下定向诱导细胞融合以及直接挑选杂交细胞。

1.4 微流控制细胞配对和融合技术 （Microfluidic control of cell pairing and fusion）（Nature Method,2009）
 
2 融合细胞的筛选
     与植物杂合细胞筛选的模式类似。
          同型合胞体（同核体）：其中含有两个或多个相同细胞核
  合胞体 í
          异型合胞体（异核体）：含有两个或多个不同的细胞核。
 
杂种细胞：少数异型合胞体细胞核融合，染色体合并到一个细胞核内。
        亲本体细胞来自同一物种——两套染色体彼此相容不发生排斥
融合细胞 í
          亲本体细胞来自不同物种——产生排斥现象(其中一套优先排斥)
        
2.1 基于酶缺陷型细胞和药物抗性等所建立的杂种筛选（HAT等）
2.2 基于营养缺陷型细胞等所建立的杂种筛选
2.3 基于温度敏感突变型细胞组成的杂种筛选
2.4 利用荧光激活分选技术进行筛选
 
3 融合细胞克隆化
        利用单个 细胞培养 的技术选育出遗传稳定的、能表达特定性状的细胞系。
3.1、有限稀释法
3.2、半固体培养基法
3.3、显微操作法
    克隆化后的细胞,经过有限的扩增以后立刻就要冻存种子细胞.
 
鉴定 细胞克隆，筛选具有所需性状的杂种细胞
 
杂交细胞的遗传表型：多样性；不稳定性
 
4 细胞融合技术的 主要 应用 :
       l) 染色体的基因定位 ；
       2) 遗传疾病的治疗与基因互补分析；
       3) 特殊活性物质的制备——淋巴细胞杂交瘤技术。