生化实验的基本操作
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1.配制溶液时,必须随时搅拌或振荡混合。配制完了时,必须充分搅拌或振荡混合。
2.搅拌使用的玻璃搅棒,必须两头都烧圆滑。
3.搅棒的粗细长短,必须与容器的大小和所配制的溶液的多少呈适当比例关系。不能用长而粗的搅棒去搅拌小离心管中的少量溶液。
4.搅拌时,尽量使搅棒沿着器壁运动,不搅入空气,不使溶液飞溅。
5.倾入液体时,必须沿器壁慢慢倾人以免有大量空气混入。倾倒表面张力低的液体(如蛋白质溶液)时,更需缓慢仔细。
6.振荡溶液时,应沿着圆圈转动容器,不应上下振荡。
7.振荡混合小离心管中液体时,可将离心管握在手中,以手腕、肘或肩作轴来旋转离心管; 也可由一手持离心管上端用另一手弹动离心管;也可用一手大拇指和食指持管的上端,用其余三个手指弹动离心管。手指持管的松紧要随着振动的幅度变化。还可以把双手掌心相对合拢,住离心管,来回挫动。
8.在容量瓶中,混合液体时,应倒持容量瓶摇动,用食指或手心顶住瓶塞,并不时翻转容量瓶。
9.在分液漏斗中振荡液体时,应用一手在适当斜度下倒持漏斗,用食指或手心顶住瓶塞,并用另一手控制漏斗的活塞。一边振荡,一边开动活塞,使气体可以随时由漏斗泄出。
10.研磨配制肢体溶液时,要使杵棒沿着研钵的单方向进行,不要来回研磨。
(二)沉淀的过滤和洗涤
1.过滤沉淀一般使用滤纸。
2.应根据沉淀的性质选择不同的滤纸.胶状沉淀,应使用质松孔大的滤纸.一般大小颗粒的结晶形成沉淀,应使用致密孔小的滤纸。而极细的沉淀,则应使用致密孔最小的滤纸。滤纸越致密,过滤就越慢。
3.滤纸的大小要由沉淀量来决定,并不是由溶液的体积来决定。沉淀量应装到滤纸高度的1/3左右。最多不应超过1/2,通常使用直径为7-9厘米的圆形滤纸。
4.折叠滤纸应先整齐的对折,错开一点再对折,打开后形成一边一层,一边三层的圆锥体。折叠尖端时不可过于用力,以免容易出洞。放入漏斗中时,滤纸边缘应完全吻合。撕去三层一边的外面两层部分的尖端,使滤纸上缘能更好的贴在漏斗的壁上,不留缝隙。而下面部分则有空隙以利于提高过滤速度。
5.滤纸上缘一般应低于漏斗口上周0.5至1厘米。润湿滤纸时应用指尖轻压滤纸赶净滤纸和漏斗间的气泡,使滤纸紧贴漏斗壁。同时漏斗颈内必须充满液体,这样,才可籍液体的重量而对于待液体产生吸滤作用。
6.过渡时,为了防止沉淀堵塞滤纸的孔洞,通常采用倾泄法,即先小心的把溶液倾入漏斗而不使沉淀流入,只在过滤的最后一步才把沉淀转移到漏斗上。
7.过滤时,将玻璃棒直立在三层滤纸的中间部分,其下端接近但不能触及滤纸,并使盛器紧贴玻棒,使液体顺玻棒缓缓流入漏斗。液体最多加到距滤纸上缘3-4毫米处,过多则沉淀会因滤纸的毛细管作用而爬到漏斗壁上去。
8.在容器中洗涤沉淀一般采用倾注法。洗涤时,采取少量多次的方法最为有效。通常,容易洗涤的粗粒晶形沉淀洗 2—3次,难洗涤的粘稠无定形沉淀则需洗 5—6次。注意,每次都应尽量倾以增加洗涤效率,并防止沉淀流失。
9.转移沉淀时,先向沉淀中加入滤纸一次所能容纳量的洗涤液,搅拌成为混悬液,不要等待沉淀下沉,立即按倾注清液的同样方式倾入漏斗。容器内剩余的沉淀可以用少量洗涤液按上述方法重复数次,直到全部转移到漏斗内。
10.在漏斗内洗涤沉淀时,先将沉淀轻轻摊开在漏斗下部,再用滴管(或洗瓶)将洗涤液加入到漏斗上缘稍下的地方,同时转动漏斗,并使洗涤液沿着漏斗不断向下移动,直到洗涤液充满滤纸一半时立即停止。待漏斗中洗涤液完全漏出后,再进行第二次洗涤。通常,完全洗去沉淀所吸附的不择发物质,约需8—10次左右。确知沉淀已经洗净,需要进行必要的检验。必须注意,沉淀的过滤和洗涤工作一定要一次完成,不可间断。
(三)烘箱和恒温箱的使用
烘箱又叫干燥箱,常用的是电热鼓风干燥箱。干燥箱用于物品之干燥和干热灭菌,工作温度为50—250℃。恒温箱又叫培养箱,用于细菌、生物培养等,工作温度自室温以上至60℃。这两种
仪器
工作原理、结构及使用方法相似。
1.使用方法:
(1)检查温度计是否插入座内,应插在放气调节器中部的小孔内。
(2)把电源插头插好,合上电闸。
(3)将电热丝分组开关的旋钮拨到(l)或(2)(视需要的温度而定),再将自动恒温控制旋扭沿顺时针方向旋转,指示灯红灯亮表示电热丝开始加热。此时也可开鼓风机帮助箱内热空气对流。
(4)在恒温过程中,应注意观察温度计。待温度将要达到需要温度值(差2—3℃)时,使指示灯绿灯正好发亮,此时表示电热丝停止加热,箱内温度即能自动控制在所需要的温度(±0.5℃)。
(5)恒温过程中,如不需要多组电热丝同时加热时,应将电热丝分组开关的旋钮拨到(1)档。
(6)工作一定时间后需要将潮气排出,可打开放气调节器,也可打开鼓风机。
(7)使用完后,关闭鼓风机马达开关,将电热丝分组开关旋钮和自动恒温控制旋扭沿反时针方向施回至零位。
(8)断开电闸,将电源插头拨出插座。