DNA分子量标准问题分析

问题

原因

解决办法

带弱或无DNA带

1) 上样DNA的量不够

增加DNA的上样量，聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高

2) DNA降解

避免DNA的 核酸酶 污染

3) DNA走出凝胶

减短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度

4) 对于EB染色的DNA，所用紫外光源不合适

应用短波长（254nm），紫外灯增强灵敏度

DNA带缺失

1) 小DNA带走出凝胶

减短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度

2) 分子大小相近的DNA带不易分辨

增加电泳时间，核准正确的凝胶浓度

3) DNA 变性

电泳前请勿高温加热DNA链，以20mM NaCl Buffer稀释DNA

4) 巨大DNA链，凝胶电泳不合适

在脉冲电声凝胶电泳上分析

DNA带模糊

1) DNA降解

避免 核酸酶 污染

2) DNA上样量过多

减少凝胶中DNA上样量

3) 所用电泳条件不合适

电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃,巨大DNA链，温度应＜15℃，核查所用电泳 缓冲液 是否有足够的缓冲能力

4) DNA样含盐过高

电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐

5) 有蛋白污染

电泳前酚抽提去除蛋白

6) DNA变性

电泳前勿加热，用20mM NaCl 缓冲液 稀释DNA

不规则DNA带迁移

1) 对于λ/Hind III片段COS位点复性

电泳前加热DNA 65℃加热5-10分钟，然后在冰上冷却5分钟

2) 电泳条件不合适

电泳电压不超过20V/cm，温度＜30℃，电泳缓冲液有足够的缓冲能力

3) DNA变性

以20mM NaCl Buffer稀释DNA，电泳前勿加热