食物中维生素C的提取和含量测定

（ 2 ， 4 －二硝基苯肼法）

 

【实验目的】

 

1．熟悉维生素C的生理功能。

 

2．掌握食物中维生素C的提取和含量测定。

 

【实验原理】

 

维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，是具有L-糖构型的不饱和多羟化合物，属于水溶性维生素。维生素C缺乏时会产生坏血病，因此，又称为抗坏血酸。维生素C分布很广，植物的绿色部分及许多水果(橘类、草莓、山楂、辣椒等)的含量更为丰富。

 

维生素C具有很强的还原性。易被氧化成脱氢维生素C。脱氢维生素C仍保留维生素C的生物活性，在动物组织内被谷胱甘肽等还原成维生素C。在pH>7.5时，脱氢维生素C易将其分子构造重新排列，使其内酯环裂开，生成没有活性的二酮古洛糖酸。维生素C、脱氢维生素C和二酮古洛糖酸合称为总维生素C。

 

食物中的总维生素C包括还原型和脱氢型两种形式。食物陈旧，贮存日久以及经过烹调处理的食物，其中有相当一部分维生素C成为脱氢型，此种形态的维生素C仍有85%左右的维生素C活性，所以对这类食物常常测定总维生素C。测定时须将样品中的还原型维生素C氧化成脱氢型维生素C。因脱氢维生素C和二酮古洛糖酸都能与2，4-二硝基苯肼作用生成红色的脎，脎的生成量与总维生素量成正比。于是将脎溶于硫酸，再与同样处理的维生素C标准液比色，可求出样品中的总维生素C的含量。

 

【器材和 试剂 】

 

1. 器材

 

硏钵、恒温水浴、72型分光光度计、 50m 1容量瓶、刻度吸管、 100m 1锥形瓶。

 

2. 试剂

 

（1）橘皮。

 

（2）9N硫酸： 25m 1浓硫酸 (比重1.84) 缓慢加入 700m 1蒸馏水中，冷却后稀释至 1000mI 。

 

（3）2% 2,4-二硝基苯肼：溶解 2g 2,4-二硝基苯肼于100ml 4.5mol/L（9N）硫酸中，过滤。 4℃ 保存。每次用前需再过滤，保存时间限于2周。

 

（4）85%硫酸： 90m 1浓硫酸(比重1.84)缓慢加入 100mI 水中。

 

（5）1%草酸溶液。

 

（6）10%硫脲：称取硫脲 50g 溶于1% 500mI 草酸中， 4℃ 保存。保存期限2个月。

 

（7）活性碳: 100g 活性碳加入750ml 1mol/L(1N)盐酸回流1～2h，过滤，用蒸馏水反复洗涤活性碳至洗涤滤液中无Fe3+为止。然后置烤箱中 110℃ 烘干冷却后置干燥器中备用。

 

（8）标准维生素C贮存液：精确称取维生素Ｃ100mg，以1％草酸溶解并定容至 100m 1， 4℃ 保存。

 

（9）标准维生素C应用液：准确吸取标准维生素C贮存液 1.0m 1置 100m 1容量瓶中，用1%草酸溶液稀释至刻度，用时现配。

 

【操作步骤】

 

1．样品提取　橘皮 2g 剪碎置硏钵中，按1%草酸10～ 15 m 1，硏磨5～10min，将提取液收集至 50 m 1容量瓶中，如此重复提取2～3次，最后加1%草酸至 50 m 1。

 

2．氧化、脱色 取上述提取液约 10m 1置于干燥 100m 1锥形瓶中，加入活性碳 0.5g ，充分振摇1min后过滤，取约 10m 1标准液于另一干燥锥形瓶中，加入活性碳 0.5g ，同法振摇、过滤。

 

3．显色：取 试管 3支，编号，按下表操作：