食物中维生素C的提取和含量测定

• （ 2 ， 4 －二硝基苯肼法）

【实验目的】

1．熟悉维生素C的生理功能。

2．掌握食物中维生素C的提取和含量测定。

【实验原理】

维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，是具有L-糖构型的不饱和多羟化合物，属于水溶性维生素。维生素C缺乏时会产生坏血病，因此，又称为抗坏血酸。维生素C分布很广，植物 的绿色部分及许多水果(橘类、草莓、山楂、辣椒等)的含量更为丰富。

维生素C具有很强的还原性。易被氧化成脱氢维生素C。脱氢维生素C仍保留维生素C的生物活性，在动物组织内被谷胱甘肽等还原成维生素C。在pH>7.5时，脱氢维生素C易将其分子 构造重新排列，使其内酯环裂开，生成没有活性的二酮古洛糖酸。维生素C、脱氢维生素C和二酮古洛糖酸合称为总维生素C。

食物中的总维生素C包括还原型和脱氢型两种形式。食物陈旧，贮存日久以及经过烹调处理的食物，其中有相当一部分维生素C成为脱氢型，此种形态的维生素C仍有85%左右的维生素C活性，所以对这类食物常常测定总维生素C。测定时须将样品中的还原型维生素C氧化成脱氢型维生素C。因脱氢维生素C和二酮古洛糖酸都能与2，4-二硝基苯肼作用生成红色的脎，脎的生成量与总维生素量成正比。于是将脎溶于硫酸，再与同样处理的维生素C标准液比色，可求出样品中的总维生素C的含量。

【器材和试剂】

1. 器材

硏钵、恒温水浴、72型分光光度计 、50m1容量瓶、刻度吸管、100m1锥形瓶。

2. 试剂

（1）橘皮。

（2）9N硫酸：25m1浓硫酸 (比重1.84) 缓慢加入700m1蒸馏水中，冷却后稀释至1000mI。

（3）2% 2,4-二硝基苯肼：溶解2g2,4-二硝基苯肼于100ml 4.5mol/L（9N）硫酸中，过滤。4℃保存。每次用前需再过滤，保存时间限于2周。

（4）85%硫酸：90m1浓硫酸(比重1.84)缓慢加入100mI水中。

（5）1%草酸溶液。

（6）10%硫脲：称取硫脲50g溶于1%500mI草酸中，4℃保存。保存期限2个月。

（7）活性碳:100g活性碳加入750ml 1mol/L(1N)盐酸回流1～2h，过滤，用蒸馏水反复洗涤活性碳至洗涤滤液中无Fe3+为止。然后置烤箱中110℃烘干冷却后置干燥器中备用。

（8）标准维生素C贮存液：精确称取维生素Ｃ100mg，以1％草酸溶解并定容至100m1，4℃保存。

（9）标准维生素C应用液：准确吸取标准维生素C贮存液1.0m1置100m1容量瓶中，用1%草酸溶液稀释至刻度，用时现配。

【操作步骤】

1．样品提取　橘皮2g剪碎置硏钵中，按1%草酸10～15 m1，硏磨5～10min，将提取液收集至50 m1容量瓶中，如此重复提取2～3次，最后加1%草酸至50 m1。

2．氧化、脱色 取上述提取液约10m1置于干燥100m1锥形瓶中，加入活性碳0.5g，充分振摇1min后过滤，取约10m1标准液于另一干燥锥形瓶中，加入活性碳0.5g，同法振摇、过滤。

3．显色：取试管3支，编号，按下表操作：

试剂

空白

标准

测定

样品滤液（ml）

2.5

—

2.5

标准滤液（ml）

—

2.5

—

10%硫脲（ml）

1

1

1

2%2,4—二硝基苯肼(ml)

0

1.0

1.0

混匀，置沸水浴中保温10min取出，流水冷却，空白管加2% 2,4—二硝基苯肼1ml。

4．脎的溶解 各管置冷水浴中缓慢加入85%硫酸3.0m1，边加边摇边冷却。加完后混匀，取出试管，室温下放置10min，于500nm波长下进行比色，以空白管凋零，测吸光度值。

【附注】

（1）生蔬菜、水果捣匀浆时可能产生泡沫，为定容准确可加数滴戊醇以除去泡沫。

（2）处理活性炭时Fe3+检查法：取活性炭洗涤滤液少许，加数滴5%亚铁氯化钾，若不出现蓝色，示无Fe3+；或加数滴1%硫氰酸钾，若不出现红色，也示无Fe3+。

【思考题】

在加入硫酸显色时，应注意哪些问题？