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五种不同的制备siRNA方法的比较

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比较项目 化学合成 体外转录 RNase III降解dsRNA siRNA
表达载体
PCR
表达框
材料需求 21-mer RNA
oligos(一对)
29-mer DNA oligos(一对) 转录模版 (200-1000bp,两侧带T7 启动子) 55-60-mer DNA oligos(一对) ~50-mer DNA oligos(一对)
全部制备/合成时间所需时间 4天—2周 24 小时 + DNA oligo合成时间 1 天 + 转录模版制备时间 5天以上 + DNA oligo合成时间 ~ 6 小时 + DNA oligo合成时间
个人所需操作时间 几乎不需要~K~Htd~M~1~0~0~0~0~0~0~Ktd~M中等 中等 中等
是否需要验证和寻找最有效siRNA 需要 需要 不需要 需要 需要
能否标记siRNA (例如用于 荧光显微镜 分析siRNA进入细胞过程或者在细胞中的定位) 不能 不能
转染的相对难易程度
可筛选性 (例如 抗生素 筛选) 不可以 不可以 不可以 可以 不可以
能否用于长效抑制 不可以 不可以 不可以 可以( 抗生素 筛选) 不可以
能否大规模制备 可以 有限 有限 可以 有限
检测总体转染效率 不可以 不可以 不可以 可以 不可以
每个基因的相对费用(不包含人力) 中等 中等 中等
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