药用植物组织中DNA的提取与纯化

• 试验目的

学习和掌握酚----氯仿提取法从药用植物组织中提取DNA的原理与技术

• 实验原理

DNA 是遗传物质, 植物DNA 的提取是植物基因工程的基础。通常要求所提取的DNA 要有理想的纯度,足够完整,无断裂降解,提取过程尽量少使用有毒化学品等。为了达到上述要求,已报道了不少提取植物DNA 的方法,归纳起来,主要有CTAB 法、SDS法和碱提取法。DNA分子是分子生物学研究的基本材料, 依不同的实验目的可采取不同的抽提方法获取数量和质量不等的DNA。植物DNA的抽提常采用两种方法：（1）SDS法；（2）CTAB法。
CTAB法简便、快速, DNA产量高(纯度稍次, 适用于一般分子生物学操作)。 CTAB是一种非离子去污剂, 也是一种阳离子表面活性剂。它既可以裂解细胞,又可以与DNA 形成复合物而溶于高盐溶液中。当盐浓度降低时,此复合物将析出,同时CTAB 可有效沉淀多糖。通过液氮研磨粉碎植物组织，裂解液裂解细胞，有机溶剂抽提，弃除样品中的蛋白质、脂肪、多糖及其它次生代谢物，及DNA提取过程中加入的饱和酚，氯仿－异戊醇（24：1）等，得到纯度较高的DNA 样品。

• 实验器材

药材、恒温水浴箱、高速冷冻离心机、移液器、离心管、超低温冰箱、

• 实验 试剂

液氮、3﹪CTAB、1.4 mol/L NaCl、20 mmol/L EDTA、100mmol/L Tris-HCl、0.5﹪PVP、 500 µl β-巯基乙醇、氯仿、异戊醇、无水乙醇 氯仿/异戊醇（24：1），70%酒精； RNA 酶；

• 实验操作

（1）称取黄芪干燥根0. 2 g ,在液氮中研磨成粉末状;将粉末转入1. 5 ml 离心管 中，并做好标记；