分子生物学常用贮存液的配制
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【配制方法】
将29g丙烯酰胺和1g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml。用滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。
【注意】 丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。
一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂(MB-1Mallinckrodt),搅拌过夜,然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。
在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
2 . 40% 丙烯酰胺
【配制方法】 把380g丙烯酰胺(DNA测序级)和20g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
【注意】 见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
3 .放线菌素 D 溶液
【配制方法】 把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中,1:10稀释贮存液,用100%乙醇作空白对照读取OD 440 值。放线菌素D(分子量为1255)纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21,900,故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182,放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20℃。
【注意】 放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。
4 . 0.1mol/L 腺苷三磷酸( ATP )溶液
【配制方法】 在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃
5 . 10mol/L 乙酸酰溶液
【配制方法】 把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。
6 . 10% 过硫酸铵溶液
【配制方法】 把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周。
7 . BCIP 溶液
【配制方法】 把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃
8 . 2×BES 缓冲盐溶液
【配制方法】 用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na 2 HPO 4 ,室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃。
9 . 1mol/L CaCl 2 溶液
【配制方法】 在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl 2 ·6H 2 O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃。
【注意】 制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃。
10 . 2.5mol/L CaCl 2 溶液
【配制方法】 在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl 2 ·6H 2 O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。
11 . 1mol/L 二硫苏糖醇( DTT )溶液
【配制方法】 用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】 DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
【注意】 丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。
一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂(MB-1Mallinckrodt),搅拌过夜,然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。
在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
2 . 40% 丙烯酰胺
【配制方法】 把380g丙烯酰胺(DNA测序级)和20g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
【注意】 见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
3 .放线菌素 D 溶液
【配制方法】 把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中,1:10稀释贮存液,用100%乙醇作空白对照读取OD 440 值。放线菌素D(分子量为1255)纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21,900,故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182,放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20℃。
【注意】 放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。
4 . 0.1mol/L 腺苷三磷酸( ATP )溶液
【配制方法】 在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃
5 . 10mol/L 乙酸酰溶液
【配制方法】 把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。
6 . 10% 过硫酸铵溶液
【配制方法】 把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周。
7 . BCIP 溶液
【配制方法】 把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃
8 . 2×BES 缓冲盐溶液
【配制方法】 用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na 2 HPO 4 ,室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃。
9 . 1mol/L CaCl 2 溶液
【配制方法】 在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl 2 ·6H 2 O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃。
【注意】 制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃。
10 . 2.5mol/L CaCl 2 溶液
【配制方法】 在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl 2 ·6H 2 O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。
11 . 1mol/L 二硫苏糖醇( DTT )溶液
【配制方法】 用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】 DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。