常用贮存液的配制
互联网
|
溶液 |
配制方法 |
说明 |
|
30%丙烯酰胺
|
将29g丙烯酰胺和1g N,N ’ -亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中，加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌 ，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。
|
小心：丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。
在贮存期间，丙烯酰胺和双酚烯胺会缓慢转化成丙烯酸和双丙烯酸。
见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。 |
|
40%丙烯酰胺
|
把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N,N ， -亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。 |
|
|
放线菌素D
|
把20mg放线菌素D溶解于4ml100%乙醇中，1：10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD 440 值。放线菌素D（分子量为1255D）纯品在水溶液中的摩尔消光系数为21900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。 |
小心：放线菌素D是致畸剂和致癌剂，配制溶液时必须戴手套并在化学通风橱内操作，而不能在开放的实验桌面上进行，谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等的添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。 |
|
0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP） |
在0.8ml水中溶解60mg ATP，用0.1mol/L NaOH调PH值至7.0，用蒸馏水定容至1ml，分装成小份保存于-70℃。 |
|
|
10mol乙酸铵 |
把770g乙酸铵溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。 |
|
|
10%过硫酸铵 |
把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。 |
|
|
BCIP
|
把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。 |
|
|
2×BES缓冲盐溶液
|
用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g BES[N,N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCI和0.027g Na 2 PHO 4 ,室温下用HCI调节该溶液的pH值至6.96，然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。 |
|
|
1mol/L CaCI 2
|
在200ml纯水中（Milli-Q水或相当级别的水）溶解54g CaCI 2 ·6H 2 O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。 |
|
|
2.5mol/L CaCI 2
|
在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCI 2 .6H 2 O,用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。 |
制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用纯水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。 |
|
1mol/L二硫苏糖醇（DTT） |
用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。 |
DTT或含有DTT和溶液不能进行高压处理。
|
|
0.5mol/LEDTA(PH8.0)
|
在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na·2H 2 O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒），然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。 |
EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0时，才能完全溶解。
|
|
溴化乙锭（10mg/ml）
|
在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。 |
小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。这些溶液使用后应进行净化处理。 |
|
2×HEPES缓冲盐溶液
|
用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCI、0.074g KCI、0.027g Na 2 HPO 4 ·2H 2 O、0.2g葡聚糖和1g HEPES，用0.5mol/L NaOH调节pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。 |
|
|
IPTG
|
IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3D），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。 |
|
|
1mol/L乙酸镁 |
在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L，过滤除菌。 |
|
|
1mol/L MgCI 2 |
在800ml水中溶解203.3g MgCI 2 ·6H 2 O,用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。 |
MgCI 2 极易潮解，应选购小瓶（如100g） 试剂 ，启用新瓶后勿长期存放。 |
|
β-巯基乙醇（BME） |
一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃ |
BME或含有BME的溶液不能高压处理。 |
|
NBT |
把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。 |
|
|
酚：氯仿
|
把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris·CI(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01ml/L Tris·CI(pH7.6)液层，保存于4℃。 |
小心：酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的皮肤部位应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 |
|
10mmol/L
苯甲基磺酰氟（PMSF）
|
用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml (10mmol/L)，分装成小份贮存于－20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml贮存液（100mmol/L）。
|
小心：PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险，一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。
PMSF在水溶液中不稳定，应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmol/L的PMSF水溶液的半寿期大约为35分钟。这表明PMSF溶液调节为碱性（PH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。 |
|
磷酸缓冲盐（PBS）
|
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCI、0.2g KCI、1.44g Na 2 HPO 4 、 0.24g KH 2 PO 4 ，用HCI调节溶液的pH值达7.4，加水定容至1L，在15Ibf/in 2 (1.034×10 5 Pa)高压下蒸汽灭菌20分钟。保存于室温。 |
|
|
1mol/L乙酸钾（PH7.5） |
将9.82g乙酸钾溶解于20ml纯水（Mill-Q水或相当级别的水）中，用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。 |
|
|
乙酸钾溶液（用于碱裂解） |
在60ml 50mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。 |
|
|
3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0） |
在800ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。 |
|
|
5mol/L NaCI |
在800ml水中溶解292.2g NaCI加水定容至1L，分装后高压灭菌。 |
|
|
10%十二烷基硫酸钠（SDS） |
在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。 |
SDS的微细晶粒易于扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。 |
|
20×SSC
|
在800ml水中溶解175.3g NaCI和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/L NaOH溶液调节pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。 |
|
|
20×SSPE
|
在800ml水中溶解175.3g NaCI、27.6g NaOH溶液调节pH值至7.4(约需6.5ml 10mol/L NaOH)，加水定容至1L，分装后高压灭菌。 |
|
|
100%三氯乙酸 |
在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100％（w/v）TCA。 |
|
|
1mol/L Tris
|
在800ml水中溶解121.1g Tris碱，加入浓HCI调节PH值至所需值。
PH HCI
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。 |
如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃，并制备质量更好的Tris。
尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。
Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，PH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃和37℃的pH值分别为9.5、8.9和8.6。
|
|
Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/L Tris）
|
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCI、0.2g KCI和3g Tris碱，加入0.015g酚红并用HCI调pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在15lbf/in 2 (1.034×10 5 Pa)高压下蒸汽灭菌20分钟，于室温保存。 |
|
|
X-gal
|
X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，用二甲基甲酰胺溶解X-gal配制成20mg/ml的贮存液。保存于玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的 试管 须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌 |
