PCR在淋巴细胞抗原受体研究中的应用
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PCR 在淋巴细胞抗原受体研究中的应用
T细胞识别各种抗原，是依靠细胞表面的T细胞受体复合物(TCR)。TCR是由4条多肽链(α.β.γ.δ)组成，每条链由相应的基因编码，其基因是由高变区(V)，多样区(D)，连接区(J)和恒定区(C)组成。由于不同的V―D―J重排，使PCR产生多样性和特异性。经PCR扩增可以检测细胞单克隆基因重排，同样，免疫球蛋白(Ig)重链基因重排是产生抗体多样性和特异性的主要机理。不同的B细胞克隆可发生不同类型的重链基因重排，Ig重链可变区的多样性源于其基因的可变区，多样区和连接区的重排结果。可变区基因的可变性集中在三个区域，被4个序列保守框架区(FR1―4)所分割。由于这三个高可变区决定着抗体与抗原的结合部位，因此被称为互补决定区(CDR)，其中第三个互补决定区(CDR3)含有几乎所有V―D―J信息，可变性较高，可以代表细胞基因重排克隆标志。
采用PCR方法检测基因重排的基本策略是针对已知的发生V―D―J重排的不同方式而设计出1对或多对相应的引物，进行一次或数次PCR扩增。将扩增产物直接测序或酶切及电泳分析，即可确定重排序列。
利用PCR技术检测细胞基因重排，在肿瘤免疫研究中，已应用于淋巴细胞白血病的临床检测。对单克隆起源的急性淋巴细胞白血病，应用具有高度特异性和敏感性的PCR方法，很容易与正常的多克隆淋巴细胞的基因重排相鉴别，作为肿瘤克隆的标志，可进行微小残留病灶的检测。
PCR技术已应用于检测白血病时的有：①T细胞受体β链基因重排；②TCRγ链基因重排；③TCRδ链基因重排；④免疫球蛋白重链基因CDR3序列重排；⑤t(1;19)(q23;p13)染色体易位产生的E2A/PBX1融合mRNA；⑥t(10;14)(q24;q11)染色体易位；⑦检测B细胞肿瘤时t(14;18)染色体易位等血液系统恶性肿瘤多种基因重排，基因突变以及人类T.B淋巴细胞白血病等。
