肽核酸原位杂交

肽核酸原位杂交

 

    肽核酸(peptide nucleic acids，PNA)是20世纪90年代初发现的新型DNA ／RNA同类物，是一类人工合成的以电中性的肽链酰胺2―氨乙基甘氨酸组成的多聚酰胺键取代DNA中的戊糖磷酸二酯键骨架而形成的类似核苷酸的物质。像传统的DNA序列那样，PNA寡聚体的氨基末端相当于DNA的5’端，其羧基末端相当于DNA的3’末端。尽管PNA单体也具有一个游离的氮末端和一个游离的碳末端，但严格说来它既非肽又非酸，仅仅具有一个拟肽骨架，因而化学上和蛋白质(肽)更为接近。它与DNA的相同之处在于PNA也携带ATCG四种碱基单体，这就保证了PNA能够按照碱基互补的原则识别相应的碱基序列。与DNA不同的是它没有磷酸戊糖骨架，因在结构上与传统的寡核苷酸有所不同，故与寡核苷酸相比，PNA寡聚体具有独特的特性：

 

    1．由于PNA的电中性骨架，其分子中不含磷酸基团，因此PNA链更容易和带有负电荷的互补序列的DNA或RNA链结合，而且形成的复合物分子较DNA／DNA双链或DNA／RNA杂交链更为稳定。

 

    2。PNA与核酸杂交不仅具有很高的亲和性，还有很高的特异性。PNA对互补DNA的错配容忍程度比相应的DNA／DNA更低，一个15mer的PNA／DNA分子在其中间段出现一个错配碱基，其Tm值下降8～20℃，两个碱基错配则完全不能杂交。

 

    3．PNA不被目前已知的任何核酸酶或蛋白酶所降解。如在合成PNA时将其标记，即可作为原位杂交等分子杂交技术的探针以检测靶核酸。以PNA作为探针的原位杂交操作程序类似于普通原位杂交技术，杂交前探针要在80℃变性3分钟，然后在室温杂交。由于PNA具有上述特性，因此肽核酸原位杂交具有其独特的优势。

---