光学切片

互联网2010-12-02

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光学切片

激光共聚焦成像的特性使其不仅能获得胜过普通显微镜的分辨率，同时具有深度识别能力和纵向分辨率，从而可以清晰地观察较厚的标本，并可以掌握其细节。以一个最小步距0.1um的微动步进马达控制载物台升降，使聚焦平面依次位于组织标本的不同层面，可以逐层获得标本相应的光学横断面图像。这一过程称为“光学切片”，这种功能称为“显微CT”。如图所示，用激光扫描共聚焦显微镜对经过荧光染色的神经元从细胞顶部按照Z轴步距，逐层向细胞底部进行断层扫描，即可获得该神经元相应的光学横断面图像。图中可以清楚地发现，在细胞顶部，其胞体面积及突起数量很少，然后依次增加；在细胞中间部位胞体面积和突起数量最多，而后又依次减少；细胞底部胞体面积明显减少，突起已经基本消失。同时，激光扫描共聚焦显微镜还可以利用免疫荧光组织化学以及原位杂交方法的双重或多重标记同时显示被检细胞亚细胞结构和靶分子(蛋白或基因等)与细胞或所在组织的关系。