火箭免疫电泳法测定补体C4、B因子

1、主要试剂

（1）羊抗人C4抗血清 按说明书所示单扩效价扩大2-4倍稀释，或分别用含不同浓度抗体的琼脂糖凝胶浇板，选择峰高、清晰度适当的抗体浓度为最适工作浓度；

（2）羊抗人B因子抗血清 按说明书所示单扩效价扩大3-5倍稀释，也可按选择C4抗血清稀释浓度的方法确定最适工作浓度；

（3）电泳缓冲液 称取10.30g巴比妥钠，1.83g巴比妥，溶于1000mL蒸馏水中。此液为pH8.6，离子强度0.05的巴比妥缓冲液；

（4）凝胶缓冲液 以定量测定时用1：4稀释的电泳缓冲液，B因子定量时1:5稀释；

（5）染色液 0.25%考马斯亮蓝，称取0.25g考马斯亮蓝R-250，溶于100mL脱色液中；

（6）脱色液 甲醇900mL、冰醋酸200mL、蒸馏水900mL。

2、操作步骤

（1）1%琼脂糖凝胶板的制备：称取0.50g琼脂糖和1z聚乙二醇（PEG 6000）置100ml三角烧瓶中，加入50ml凝胶缓冲液，隔水煮沸至琼脂糖完全溶解，55℃保温；加入适量的抗C4血清或抗B因子血清（预先实验选定）混匀，浇板，凝胶厚度lmm。沿阴极端约2cm处打孔，孔间距6-8mm，孔径3-3.5mm；

（2）待测样本用凝胶缓冲液1：10稀释，参考血清对倍稀释（一般作5个稀释度），每孔加5-I0ul；

（3）将样本孔端接负极，电压12.5V/cra电泳5h；

（4）取出凝胶板，用生理盐水漂洗2次，去离子水漂洗1次；

（5）将干净滤纸铺在凝胶板上，干燥、常规染色、脱色；

（6）结果计算：量取各火箭峰的高度，根据峰高—浓度标准曲线计算待测样本中C4或Bf含量。