薄层层析分离中的显色与定量

 

薄层层析（TLC）技术

一、薄层层析分离 中的显色：

薄层层析 分离中的薄层板展开后，从展开装置中取出，放入干燥器中干燥，然后根据被分离物质的种类和性质，选用相应的显色剂显色或用紫外光检测被分离物质的斑点，测量和计算各斑点的迁移率。

样品所含溶质较多或某些组分在单相薄层层析 分离中的迁移率比较接近，不易明显分离时，可采用双相薄层层析分离。双相薄层层析分离是将滤纸用一种溶剂展开后吹干，将滤纸转动90度后再用另一种溶剂展开，待溶剂到达所要求的距离后，取出薄层干燥显色，从而获得双相层析谱。采用双相薄层层析分离，如果溶质在第一种溶剂中不能完全分开，而经过第二种溶剂的层析后能够完全分开，大大提高了分离效果。

二、薄层层析分离中的定量 ：

1、采用喷雾显色时，不加粘合剂的薄层要小心操作，以免吹散吸附剂。

2、采用强腐蚀性显色剂显色时，这些显色剂几乎可以使所有的有机化合物转变为碳，如果支持剂是无机吸附剂，薄层板经显色剂喷雾后，被分离的有机物斑点显示黑色。此类显色剂不适用于定量测定和制备用的薄层。

3、如果样品斑点在紫外光照射下不显荧光 ，可采用荧光薄层检测法，即在吸附剂中加入荧光物质或在制备好的薄层上喷雾荧光物质，制成荧光薄层，这样在紫外光照射下薄层显示荧光，而样品斑点不显荧光。

4、薄层边缘含水量不一致、薄层厚度、溶剂展开距离的增大，均会影响迁移率，因此在鉴定样品成分时，应用已知标准样作对照。

5、定量时，可对斑点作光密度测定，也可将一个斑点显色，而将与其相同迁移率的另一未显色斑点从薄层板上连同吸附剂一起刮下，然后用适当的溶剂将被分离的物质从吸附剂上洗脱下来，进行定量测定。