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微生物生物量和生长曲线的测定

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实验原理

我们知道微生物都具有生长旺、繁殖快的特点，单细胞微生物如细菌、酵母菌的个体细胞的增大即细胞物质的增加是有限度的，细胞长大到 一定程度就开始分裂繁殖，菌体数量增多。细菌旺盛生长时几十分钟就可繁殖一代。
因此他们的生长往往是通过繁殖表现出来的，本质上是以群体细胞数目增加为生长标志。丝状微生物如放线菌、霉菌的生长主要表现为菌丝的伸长和分枝，他们相互缠绕，很难分清个体与个体之间的界限，所以通常以菌丝的重量增长(细胞质量的增加)或菌丝生长速度间接来衡量生长状况。目前测定微生物数量的方法有直接法和间接法。直接法包括血球计数板法、涂片染色法、比浊法等；间接法又包括平皿菌落计数法、液体稀释法、薄膜过滤计数法等。测定细胞物质量的方法有定氮法测、DNA法、测定细胞干重法、测定细胞湿重法、生理指标测定法等。
为了学习微生物的生长规律，增进了解微生物生长旺、繁殖快的特点，以酵母、放线菌和黄瓜枯萎病菌作为实验材料，本实验采用了干/湿重法、血球计数法直接计数、比浊法以及菌丝长度测量法,测定了放线菌及黄瓜枯萎病菌的生长量和黄瓜枯萎病菌的生长曲线，绘制了酵母生长标准曲线（细胞数密度-OD420）。

实验试剂

实验设备

震荡器
血球计数板(0.10mm 1/400mm2 16×25)
电炉
恒温培养摇床
普通离心机
超净工作台
恒温培养箱
手提式高压蒸汽灭菌锅
光学显微镜
721型分光光度计
比色皿
布氏漏斗
烘箱
打孔器
接种环
定性滤纸
直尺等

实验材料

实验步骤

注意事项

微生物的生长繁殖是其内外各种环境因素相互作用下生理、代谢等状态的综合反映，因此，有关生长繁殖的数据就可以作为研究多种生理、生化和遗传等问题的重要指标；同时，微生物在生产实践上的各种应用或人类对致病、霉腐等有害微生物的防治，也都与它们的生长繁殖或抑制紧密相关。
本实验方法有其显著的优点，也有一些不足之处：
1. 血球计数板是一种常用的微生物直接技术方法，具有直观快速、容易操作等优点，但费力，伤眼睛，且对菌悬液浓度要求高，一般不宜过低或过高(常大于10~6个/ｍ），OD值应在0.1-0.65之间，不易把握。而且此法不能测出活菌数，若选用台酚蓝等染色液,可使死细胞染为蓝色,活细胞不被染色，从而测出活菌数。
2. 湿重法和干重法可以体现发酵液中生物质的多少,但不能反映菌丝生理状态,衰老程度,甚至不能区分细胞死活。
3．对辐射生长的丝状真菌进行菌丝生长速率法衡量其生长状况来的简捷、方便，但似乎应用性不强。
因此，每种方法都各有优点和局限性，只有在考虑了这些因素同需要着手解决的问题之间的关系以后，才能选择较优者，或者几种方法同时并用。

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