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三色书虱外部形态的扫描电镜观察

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实验试剂

 

饿酸[Polysciences Inc.]

戊二醛[国药集团化学试剂有限公司]

叔丁醇[中国医药集团上海化学试剂公司]

单宁酸[天津市大贸化学试剂厂]

乙腈[天津市大贸化学试剂厂]

实验设备

 

光学显微镜[OLYMPUS]

S-3000N电子显微镜[HITACHI]

E-1010/E离子溅射仪[HITACHI]

实验材料

 

三色书虱采自野外,在实验室内建立种群。

实验步骤

 

1. 玻片制作

将用75%-80%酒精浸泡的书虱标本用70%的酒精洗涤2-3次,用加拿大胶封固,在45℃烘箱中烘15天左右,干燥后用指甲油加封盖玻片的四周,第一次干燥后,再二次加封,防止固定胶内的水气透出以免干燥。所有更换液体的操作在一个小玻皿内进行,用吸管将血内液体吸出,再用另一吸管吸取其他液体放入皿内,以免损坏标本。

2. 电镜前处理

按以下步骤依次进行:

   (1) 用1.5 mL的离心管取三色书虱50头或更多,因为在处理过程中会有样品损失;

   (2) 将2.5%的戊二醛约l mL加入离心管中并置于4℃冰箱里固定2h或过夜;

   (3)用一次性注射器吸出离心管中的戊二醛,再加入约lmL的pH值为7.8的磷酸缓冲液并适当震荡清洗样品,重复3次,每次15-30 min;

   (4) 用注射器吸出磷酸缓冲液,加入1%的饿酸约500µL固定1h;

   (5) 用双蒸水清洗4次,每次15-30 min;

   (6) 用2%的单宁酸约500µL浸泡2h或过夜(单宁酸能与饿酸结合,增加电子反差,使更多饿酸分子和样品分子结合);

   (7) 用双蒸水清洗4次,每次15-30 min;

   (8) 再加入1%的饿酸约500µL固定1h后,用双蒸水清洗4次,每次15-30 min;

   (9) 依次经过30%,50%,60%,70%,80%,90%,100%酒精脱水,每次15 min;

   (10) 采用叔丁醇一乙腈干燥法进行干燥:50%叔丁醇处理10 mim,70%叔丁醇处理10 min,100%叔丁醇处理10 min,叔丁醇一乙睛(2:1)处理10 min,叔丁醇一乙睛(1:1)处理10 min,100%乙睛处理10 min;

   (1l ) 用E-1010/E离子溅射仪进行离子镀膜。

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