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TSK-Gel凝胶色谱柱清洗方法

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1864

      亲水性乙烯基树脂基质蛋白分离用色谱柱,除了可选用键合了离子交换基团的离子交换柱外,还可选用疏水反应、亲和等其他多种类型的柱子。
      这些类型的色谱柱,其充填介质化学稳定性好,不易发生由于官能基脱落而导致样品组分洗脱位置变化的现象。尽管如此,由于柱子的反复使用,在长时间使用后,样品组分的洗脱情况还是会发生改变的。其原因与样品中极微量的附吸物在柱中的蓄积有关。特别由于生物样品组分复杂,这种吸附现象时有发生。(非特异性吸附)当观察到这样的现象后,应使用合适的溶剂将蓄积的吸附物质去除,以恢复柱子的性能。

1、0.1-0.2mol/L NaOH水溶液(ABA-5PW柱不适用)
测定状态下,用0.1-0.2mol/L的NaOH水溶液通过样品进样阀清洗数次(3-5回)。
2、20-40% 醋酸水溶液
与上述NaOH水溶液的清洗方法相同。
3、在淋洗液中添加水溶性有机溶剂(疏水性吸附物质的去除)
在淋洗液中添加甲醇、乙腈等水溶性有机溶剂(浓度《20%)进行过柱清洗。(注意盐的析出)
4、在淋洗液中添加尿素、中性界面活性剂(难溶性蛋白的去除)
在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或0.2-0.3%的中性界面活性剂(Triton、Tween、Brij等)后进行过柱清洗。但需注意尿素及界面活性剂的柱中残留。

      通常情况下,使用方法1和2便可将吸附物质去除。如果方法1和2不能恢复柱效,则可使用方法3和4。注意,在附吸成分其吸附力极强时,即使进行过清洗,柱性能也有可能得不到恢复。

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