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高效液相色谱仪的使用方法

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5032

    仪器名称:高效液相色谱仪

  仪器型号:Agilent1100

  生产厂家:Agilent

  使用方法:

  (一)、开机:

  1、打开计算机,进入WindowsNT(或Windows2000)画面,并运行BootpServer程序。

  2、打开1100LC各模块电源。

  3、待各模块自检完成后,双击Instrument1Online图标,化学工作站自动与1100LC通讯,进入的工作站画面如下所示。

  4、从“View”菜单中选择“MethodandRuncontrol”画面,单击”View”菜单中的“ShowTopToolbar”,“Showstatustoolbar”,“Systemdiagram”,”Samplingdiagram”,使其命令前有“√”标志,来调用所需的界面。

  5、把流动相放入溶剂瓶中。

  6、打开Purge阀。

  7、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Setuppump选项,进入泵编辑画面。

  8、设Flow:5ml/min,单击OK。

  9、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Pumpcontrol选项,选中On,单击OK,则系统开始Purge,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续Purge,直到所有要用通道无气泡为止。

  10、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击PumpControl选项,选中Off,单击Ok关泵,关闭

  Purgevalve。

  11、单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Setuppump选项,进入Pump编辑画面,设Flow:1.0ml/min。

  12、单击泵下面的瓶图标,如图所示(以二元泵为例),输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。单击Ok。

  (二)数据采集方法编辑:

  1、开始编辑完整方法:

  从“Method”菜单中选择“Editentiremethod”项,如上图所示选中除“Dataanalysis”外的三项,单击Ok,进入下一画面。

  2、方法信息:

  在“MethodComments”中加入方法的信息(如:方法的用途等)。

  单击Ok进入下一画面。

  3、泵参数设定:(以二元泵为例)

  在“Flow”处输入流量,如1ml/min,在“SolventB”处输入70.0,(A=100-B),也可Insert一行”Timetable”,编辑梯度。在“PressureLimitsMax”处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。

  单击Ok进入下一画面。

  4、自动进样器参数设定:

  选择合适的进样方式,如图所示,进样体积1.0ul,洗瓶位置为6号。“StandardInjection”----只能输入进样体积,此方式无洗针功能。“InjectionwithNeedleWash”----可以输入进样体积和洗瓶位置,此方式针从样品瓶抽完样品后,会在洗瓶中洗针。“Useinjectorprogram”---可以点击Edit键进行进样程序编辑。

  点击Ok进入下一画面。

  5、柱温箱参数设定:

  ●在”Temperature”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”more>>”键,如图所示,选中”Sameasleft”---使柱温箱的温度左右一致。

  ●点击ok进入下一画面。

  6、VWD检测器参数设定:

  ●在”Wavelength”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在”Peakwidth(Responsetime)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间,如>0.1min(2s)。

  ●在Timetable中可以“Insert”一行,输入随时间切换的波长,如1min,波长=300nm。点击ok进入下一画面。

  7、DAD检测器参数设定:

  ●检测波长:254nm,BW=30nm,参比波长=350nm,BW=100nm;

  ●检测波长:一般选择最大吸收处的波长。样品带宽BW:一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长:一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽BW:至少要与样品信号的带宽相等,许多情况下用100nm作为缺省值。Peakwidth(Responsetime):其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。Slit―狭缝窄,光谱分辨率高;宽时,噪音低。同时可以输入采集光谱方式,步长,范围,阈值。选中所用的灯。

  ●点击Ok进入下一画面。

  8、RID检测器参数设定:

  ●色谱条件:

  进样体积:20ul。光学单元温度:Off。

  极性:正。峰宽(响应时间):4s。

  ●如图所示:“OpticalUnitTemperature”---若环境温度控制在±2℃,设定为Off,若环境温度不稳定,则设定光学单元温度为高于环境温度5度,以防样品在池中沉淀。“Peakwidth”---大多数分析设为4S,只有在高速分析下设为更短。“Automaticrecyclingafteranalysis”---在不进行分析时可以让流动相循环,节省流动相,检测器连续运行,可随时投入使用。

  ●****点击RID图标,选择RIDControl:Heater设为On,若要循环流动相,必须将“RecyclingValve”设为ON。手动purge参比池,将其设为On,并输入Purge时间。

  9、FLD检测器参数设定:

  色谱条件:

  ●样品:P/N01018-68704用甲醇稀释为1:10。

  ●进样体积:5ul。

  ●柱温箱:30℃。EX=246nm,EM=317nm,PMT=10。

  ●响应时间=4s.停止时间:出峰完毕。

  ●ExcitationA:激发波长:200-700nm,步长为1nm,或ZeroOrder。

  ●Emission:发射波长:280-900nm,步长为1nm,或ZeroOrder。

  ●PMT:大多数应用适当的设定值为10,若高浓度样品峰被切平头,则减少PMT值。

  ●“Peakwidth”:大多数应用设为4s,只有快速分析采用小的设定值。

  ●MultiEx:多波长及光谱(激发)。

  ●MultiEm:多波长及光谱(发射)。

  ●同时可以输入范围Range、步长step、采集光谱。

  10、在“Runtimechecklist”中选中“Dataacquisition”,单击Ok。

  11、单击“Method”菜单,选中“Savemethodas”,输入一方法名,如“test”,单击Ok。

  12、从菜单“View”中选中”Onlinesignal”,选中Windows1,然后单击Change钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击Ok.(如同时检测二个信号,则重复12,选中Windows2)。

  13、从“Runcontrol”菜单中选择“Sampleinfo”选项,如上图所示,输入操作者名称,在“Datafile”中选择“Manual”或“Prefix”。

  区别:Manual--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。Prefix―在Prefix框中输入前缀,在Counter框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名,如vwd0001,vwd0002……。

  14、从Instrument菜单选择Systemon。

  15、等仪器Ready,基线平稳,从Method菜单中选择“Runmethod”,进样。

  (DAD,VWD色谱图如下所示:)

  (三)、数据分析方法编辑:

  1、从“View”菜单中,单击“Dataanalysis”进入数据分析画面。

  2、从“File”菜单选择“Loadsignal”,选中您的数据文件名,如下图所示。单击Ok。

  3、做谱图优化,从“Graphics”菜单中选择“Signaloptions”选项,。从Ranges中选择Autoscale及合适的显示时间,单击ok,或选择”UseRanges”调整。反复进行,直到图的比例合适为止。

  4、积分:

  (1)、从“Integration”中选择“Autointegrate”,如积分结果不理想,再从菜单中选择“IntegrationEvents”选项,选择合适的Slopesensitivity,Peakwidth,Areareject,Heightreject。

  (2)、从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项,则数据被积分。

  (3)、如积分结果不理想,则修改相应的积分参数,直到满意为止。

  (4)、单击左边“√”图标,将积分参数存入方法。

  5、打印报告:

  (1)、从“Report”菜单中选择“Specifyreport”选项,进入如上画面。

  (2)、单击“QuantitativeResults”框中Calculate右侧的黑三角,选中Percent(面积百分比),其它选项不变。

  (3)、单击Ok.

  (4)、从“Report”菜单中选择“Printreport”,则报告结果将打印到屏幕上,如想输出到打印机上,则单击Report底部的“Print”钮。

  (四)、关机:

  ●关机前,用100%的水冲洗系统20分钟,然后用有机溶剂冲洗系统10分钟(如ACN),然后关泵,(适于反相色谱柱)。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]

  ●退出化学工作站,及其它窗口,关闭计算机(用shutdown关)

 

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