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色谱仪的日常维护

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    1、日常维护

  1.1泵

  泵是液相色谱仪的心脏,须精心维护和保养。处于良好工作状态的泵,其基线平稳,保留时间重现性好,梯度洗脱时压力变化缓慢而平稳。要使泵具备良好的操作性能,应该保持泵系统的洁净。具体做法如下:

  (1)要选择优质的溶剂和试剂,在进入仪器前用0.45um膜过滤,并进行脱气处理。

  (2)泵开始使用时,一定要对其排气数分钟;使用完毕,要用流动相清洗泵和色谱柱约30分钟;如果使用了缓冲溶液,一定要用合适的流动相彻底清洗干净。

  (3)定期检查并更换在线过滤片及有关的垫圈,并经常清洗进液处的微孔过滤头。

  (4)改变流动相时,应避免沉淀产生,以防止泵堵塞。

  1.2色谱柱

  色谱柱是化合物分离的关键。保养良好的色谱柱应具有很高的塔板数,且仪器基线平稳。色谱柱比较娇气,在平时的工作中须注意以下事项:

  (1)色谱柱不能够碰撞、弯曲或强烈震动;安装时,一定要保证阀件或管路的清洁。

  (2)流动相在使用前必须进行脱气处理,尽量不使用或少使用高粘度流动相。

  (3)在满足灵敏度的情况下,尽可能使用小进样量。如果样品比较“脏”,要进行净化或提纯处理。

  (4)分析结束后,要清洗掉进样阀中残留的样品,并用流动相或适当的溶剂清洗色谱柱。

  (5)如色谱柱长期不用,应该用适当的有机溶剂保存并封闭或长期给柱子补充合适的流动相。

  1.3检测器

  对于紫外检测器,在分析前,柱平衡得差不多时,开启检测器;在分析完成后,马上关闭检测器。

  1.4进样器

  分析结束后,应反复冲洗进样口,防止样品的交叉污染或堵塞。

  2、常见故障的分析与排除

  即使日常精心维护的液相色谱仪,随着使用时间的增加或使用者经验的不足也会出现一些问题或故障。现将液相色谱仪容易出现的故障及解决办法介绍如下:

  2.1保留时间变化

  保留时间的变化有三种情况:波动、缩短、延长。

  保留时间出现波动时,应检查柱温是否处于恒温状态,如果设置为室温,气温的变化会引起保留时间的波动,应该设置为恒定温度;等度和梯度间还没有充分达到平衡状态时,应该用十倍以上柱体积的流动相去平衡色谱柱;缓冲液浓度太低时,应换用>25mmol/L的缓冲液;色谱柱被污染或已接近柱寿命时,应更换保护柱或换新色谱柱。

  保留时间缩短时,流速增加,应检查流速的设定;柱温高时,应检查柱温的设置;进样量太大时,减少样品用量或降低样品浓度;流动相的组成发生了改变,比如流动相中易挥发性有机相蒸发,两相之间互溶不好,会导致流动相不均匀或某一相出现部分沉淀;流动相的pH值应保持在3-7.5范围内,否则回引起柱键合相的流失。

  保留时间延长时,流速减小,应检查流速的设定和管路是否有泄露;柱温低时,检查柱温的设置;流动相的组成发生了改变,比如流动相中易挥发有机相蒸发,两相之间互溶不好,会导致流动相不均匀或某一相出现部分沉淀;检查流动相的pH是否在3-7.5范围内,否则会引起柱键合相的流失。

  2.2峰拖尾

  色谱柱超载时,要减少进样量或稀释样品或使用高容量的色谱柱;色谱柱性能不佳时,更换色谱柱;死体积或柱外体积过大时,将连接点降至最低,并对所有连接点作合理的调整,尽可能采用细内径的连接;加入硅羟基,其作用是钝化色谱柱,增加缓冲液的浓度,降低流动相的pH值,钝化样品;出现峰干扰时,应清洁样品,调整流动相。

  2.3峰展宽

  进样体积过大时,用流动相配样;样品过载时,进小浓度、小体积样品;在进样阀中造成峰扩展时,进样前后排出气泡,以降低扩散;流动相粘度过高时,提高柱温,并采用低粘度流动相;等度洗脱,保留时间过长时,要增加流速或改用梯度洗脱;柱外体积过大时,将连接管径和连接管长度降至最小[1]。

  2.4基线噪声

  流动相或检测器中有气泡时,要对流动相进行脱气处理;检测器灯有连续噪声时,更换氘灯;出现由污染引起的随机噪声时,应清洗色谱柱、净化样品、使用HPLC级试剂;偶然有噪声时,可能是来自电源的干扰,如果电压不稳时,应采用稳压电源。

  2.5肩峰或分叉

  进样量太大或样品浓度过高时,要减少进样量或稀释样品;样品溶剂太强时,应使用软弱的样品溶剂;色谱柱性能欠佳时,应更换色谱柱。

  2.6鬼峰

  色谱柱未达到平衡时,要继续平衡色谱柱;样品中溶剂出峰时,使用流动相作样品的溶剂;出现进样阀余峰时,使用强溶剂清洗进样阀,并改进阀和样品的清洗程序;流动相用水不合格,应使用HPLC级的水。

  3、使用注意事项

  在使用混合溶剂作流动相时,一定要先混合,再过0.45um滤膜;等流动相恢复至室温,用超声波或He气进行脱气处理后,方可使用。

  更换流动相时,必须按一定的程序进行,否则会产生问题。更换流动相有三种情况:互溶性流动相的更换、无互溶性流动相的更换和缓冲溶液的更换。对于第一种情况,先用准备更换的流动相把吸滤器完全清洗,再打开仪器的排液阀,按清洗键,清洗泵中的流动相。将吸滤器放入新流动相中,减慢流速清洗数分钟后关闭排液阀。接下来清洗色谱柱和检测器检测池直到基线平稳。对于第二种情况,先用与新旧流动相都互溶的中间清洗液(如:异丙醇)清洗,再用新流动相清洗,具体过程与第一种情况相同。对于第三种情况,应先用蒸馏水作为中间清洗液进行清洗,再用新流动相清洗即可。

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