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真菌检验技术的进步

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真菌检验的临床重要性日益增加。传统的真菌培养和鉴定技术需时较长,且真菌感染的病原菌常不易培养成功,成为实验诊断的难点。近年来,真菌感染的快速实验诊断技术正在努力解决这一问题。一、应用分子生物学技术自临床标本中检出真菌DNA;二、应用单抗和免疫学技术自临床标本中快速检出真菌抗原;三、利用真菌的特异性酶快速诊断真菌;四、常规培养与鉴定技术的进步,现分述如下。

一、常规分离、鉴定技术的进步利用酵母样真菌在生长过程中形成的酶,作用于培养基中的色原底物,使菌落呈现不同的颜色,此种CHROMOAGAR的应用,利于快速分离与初步鉴定酵母样真菌。酵母菌的常用鉴定系统已有以AP120C为代表的手工法,以ATB32C为代表的半自动法,以AMS为代表的自动代法借助于AMS的YBC卡的生化反应,应用人工双歧层次分析鉴定法可使鉴定正确率提高。利用酵母菌生长过程中形成的予成酶作用于合成的色原底物而制成的成套微量鉴定系统RapIDYeastplusSystem,可于4小时完成酵母菌的快速鉴定,与应用API20C的一致率达97.3%。平滑念株菌可利用其快速分解菌藻糖而迅速鉴定。用4%菌藻糖的0.1mol/L枸橼酸缓冲液,取待鉴定菌落浓涂入液中,37℃温育3h,以尿葡萄糖试纸检测,如在2分钟内显色即为平滑念珠菌。经与传统鉴定方法比较,此法的敏感性98.8%,特异性99.1%。都柏林念珠菌的临床重要性在增长,其简易可靠的鉴定试验为该菌在42℃不能生长,且-D葡萄苷酶为阴性。

二、自临床标本中直接检查抗原深部真菌感染者血中难于培养出菌体,尤其是丝状真菌菌体常粘附、缠绕于组织,血中不易出现。但组织中菌体可溶性抗原可吸收入血自血、尿或感染组织液中直接检查真菌抗原为快速诊断的重要手段;虽也可检查抗体,但难达快速诊断。、检测念球菌属的甘露聚糖及其抗原1.胶乳凝集试验

取300l血清,加100lEDTA处理液,混匀,煮沸3min,离心10000g10min,取上清40l加10lSanofi胶乳粒子,3min内出现凝集为阳性。

 

 

2.EIA法。以单抗包被酶标板,用双抗体夹心法检查血清中念球菌抗原

3.检测血中的白色念球菌的甘露聚糖抗体。ENA法检查中甘露聚糖对念珠菌感染的诊断敏感性40%,特异性98%,ENA法检查甘露聚糖抗体对念珠菌感染的诊断敏感性53%,特异性94%。

4.检查血清中D-阿拉醇或D-阿拉伯醇与L-阿拉伯醇的比值可快速诊断念珠菌病。Yeo等用基因重组的D-阿拉伯醇脱氢酶以酶荧光法定量,发现念珠菌感染者血清中菌体的D-阿拉伯醇明显升高,用此法迅速论断新生儿的侵袭性念珠菌病。Mitsutake等比较了自39名深部念珠菌病患者血液中检出抗原的四种方法。应用斑点印迹法检查其烯醇化酶抗原的阳性率71.8%,特异性100%;应用胶乳凝集检查热敏性糖蛋白抗原阳性率76.9%,特异性87.5%;应用胶乳凝集检查甘聚糖抗原阳性率75.6%,特异性100%,应用鲎试试验检查细胞壁组分-Glucan的阳性率84.4%,特异性87.5%。

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