丙型肝炎病毒核心抗原检测的临床诊断价值

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   丙型肝炎是严重威胁人类健康的传染病之一，由于至今尚无预防疫苗问世，也没有特效药物治疗，因此早期诊断是防止丙型肝炎病毒(hepatitis C viral,HCV)传播的有效手段。临床上主要~Ka_target~L~4~Sblank~4~M~Ku~M实验室诊断来辅助诊断HCV感染，了解患者体内HCV复制的情况，常用的有丙型肝炎病毒抗体(HCVAb)和HCV RNA。但是，HCVAb产生有一个明显的窗口期，早期感染容易漏检，对感染恢复后样品产生误判，而且由于不同厂商的试剂包被的HCV抗原片段有所不同，导致检测结果缺乏可比性，故难以对感染后的进程及转归提供依据。PCR检测HCV RNA灵敏度高，但影响因素也多，实验室条件要求严格，且检测费用昂贵。据文献报道［1-4］，HCV核心抗原阳性样品HCV RNA阳性率为85％以上，两者同步消长，具有极高的相关性。HCV抗原检测能够缩短HCV检测窗口期，近几年对这方面的报道陆续增多，具有可行性和较广泛的应用基础。本研究采用ELISA方法检测丙型肝炎病毒抗原(HCVAg)，对其临床应用价值进行评价。

　　1  资料与方法

 

　　1.1  标本来源  选取2006年11～12月我院住院及门诊患者血清样本91份，其中男44份，女47份；年龄13～79岁，平均年龄47.7岁。所有病例选择均符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会指定的《病毒性肝炎防治方案》中的诊断标准［5］，并排除合并感染其他病毒性肝炎，排除心、脑、肾、肺等器官疾病及高血压、糖尿病等。

 

 

　　1.2  标本检测

 

　　1.2.1  ELISA检测的简要步骤：取样本血清100 μl，加预处理液50 μl，56℃水浴30 min。酶标板每孔加入100 μl样品稀释液(包括空白，阴、阳对照孔，空白孔需加入200 μl样品稀释液)；加入100 μl阴、阳对照孔于相应孔，其余孔各加入100 μl经预处理后的待测样品；37℃水浴振荡60 min。洗板6次。每孔加200 μl酶结合物，37℃水浴30 min，再洗板。最后显色剂A、B液各100 μl，37℃水浴避光显色10 min后加50 μl终止液。反应终止10 min内，以酶标仪450 nm波长测定各孔OD值。  
　　临界值(cut off)确定：阳性对照每孔OD值＞0.6，阴性对照孔OD值＜0.1时，测定结果有效，其临界值(cut off)为：阴性对照孔平均OD值+0.06。   
　　结果判定：待检测样品的OD值＞临界值判定为HCV抗原阳性，＜临界值判定为HCV抗原阴性。

 

　　1.2.2  每份血清同时用ELISA法检测抗HCV，检测试剂由上海科华试剂公司提供。

　　1.2.3  每份血清用ABI PRISM 7000PCR仪荧光定量逆转录聚合酶反应(PCR)检测HCV RNA含量，检测试剂由广州达安基因股份有限公司提供。

　　1.2.4  每份血清用日本Olympus Au 2700全自动生化分析仪测定ALT浓度，检测试剂由第一化学药品株式会社提供。

　　1.3  统计学分析  采用SAS 8.2统计软件进行统计学处理，计数资料比较采用进行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。