悬浮阵列技术检测四种肿瘤标志物的临床诊断价值
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1. 标本来源：156份临床病理确诊的消化系统肿瘤患者（男92例，女64例，年龄12~85岁，平均年龄53岁）血清标本来自北京天坛医院和中国医学科学院肿瘤医院，其中，肝癌50份、胰腺癌33份、肠癌32份、胃癌41份。健康体检者（男70名，女57名，年龄16~68岁，平均年龄46岁）血清标本127份。
消化系统炎症患者（男47例，女48例，年龄18~70岁，平均年龄49岁）血清标本95份，其中，胆囊炎23份，急性胰腺炎23份，乙型肝炎37份，胃溃疡12份。诊断均符合各疾病诊断标准。标本均-20℃保存待测。
3. 悬浮阵列检测4种肿瘤标志物（TM）：
（1）试剂盒置室温平衡30 min，加样前充分混匀各试剂。
（2）在反应板上依次加入反应缓冲液、血清样本（或标准品）20 μl/孔，微球悬液20 μl/孔，充分混匀。
（3）37℃孵箱避光反应45 min。
（4）取出反应板加PE标记二抗溶液充分混匀，37℃孵箱避光反应30 min 后，每孔加终止液80 μl 后充分混匀。
（5）置Luminex 100多功能流式分析仪上读数，用配套软件拟合剂量一反应曲线，计算被检血清样本中各项检测指标的浓度。4. 悬浮阵列试剂盒评价：
（1）准确性：经双孔平行测定AFP、CEA试剂盒校准品和国家标准品，双孔平行测定CA242、CYFRA21-1内部质控品1、2和内质控品1、2等体积混合样本后，计算回收率。
（2）刃剂量-反应曲线的线性：双孔平行测定试剂盒中校准品，将其平均值用五参数方程进行拟合。
（3）有效检测范围：标准品最高浓度为检测上限，20次平行检测样品稀释液测定结果，计算平均值X和标准差S，以X+25为检测下限。
（4）精密度：连续5出则定同一批号试剂中高低两水平质控血清，分析批内变异系数；连续测定5 d 中不同时间5批不同批号试剂的高低两水平质控血清，分析批间CV。
（5）引干扰性：加入不同浓度甘油三酯、胆红素于标本中，并与未加甘油三酯、胆红素标本作平行检测。
（6）稳定性：将除藻红蛋白标记抗体溶液的试剂盒分组存于37℃30 d 室温1周及2~8℃保存至有效期末（有效期6个月）然后检测。6. 统计学分析：用SPSS11.5统计软件分析。同一检测项目不同方法的数据比较用配对t检验（正态分布）和秩和检验（偏态分布），并分析其相关系数、各检测方法的敏感度、阴性似然比、特异度、阳性似然比、Youden指数、一致率和ROC曲线；同时作多指标联合检测阳性预测值和阴性预测值分析。
随生命科学研究的深入，人们逐渐认识到疾病发生是多种影响因素共同作用的结果，由此即产生了高通量检测的需要。目前，此类技术已成为研究热点。悬浮阵列技术将微阵列理念与流式细胞术充分结合，以荧光微球为反应载体，反应体系为液体，可同时检测100个指标。
此外，多项硏究表明，同一肿瘤可含有多种TM，不同肿瘤或同种肿瘤的不同组织类型除共同的TM外，也可有不同的TM。因而丁TM的合理联合检测价值值得探讨。
本研究结果表明，悬浮阵列对CEA、CA242和CYFRA21-1的检测与对照试剂盒的检测结果基本一致，少数病例测定结果（尤其是低值）不一致，主要与各试剂盒制备所采用的抗体不同和低值有较小的数值变化有关。
通过ROC分析曲线证实，悬浮阵列试剂盒检测能力与同类试剂盒检测结果差异无统计学意义，且在AFP、CEA、CA242和CYFRA21-1多指标联合检测时，1~4项指标的阳性预测值逐渐升高，4项指标中有1项阳性时。
敏感度和特异度均在90%以上，4项TM指标联合检测的敏感度，高于单项TM指标检测，提示多指标联合检测对于消化系统肿瘤的诊断具有较高的辅助价值。与其他蛋白芯片比较，悬浮阵列操作简单、不需洗涤、检测结果稳定，重复性好。
与MEIA、ELISA和电化学发光技术相比，悬浮阵列技术可一次检测多项指标，具有高通量检测优势，且所需样本量少，可提高标本利用率，适用于血液，胸、腹水或其他体液，组织的同时检测。目前，许多学者正采用悬浮阵列技术进行蛋白质、核酸等方面的研究，相信此技术在临床医学领域将具有广阔的应用前景。
