生化分析仪常用分析方法

互联网2015-01-05

1980

<a target="_blank">生化</a>分析仪常用分析方法共有三大类，分别为终点法、固定时间法和动力学法。

终点法： 指经过一段时间的反应，反应达到平衡，由于反应的平衡常数很大，可认为全部底物(被测物)转变成产物，反应液的吸光度不再变化，只与被测物的浓度有关。这类方法通常称为“终点”法，更确切地说应称“平衡”法。

单试剂单波长终点法：t1时刻加入试剂（体积为V），t2刻加入样本

（体积为S），然后搅拌并反应，之后开始测量反应液的吸光度，

在t3时刻反应达到终点，t3－t2为测定时间。

反应度R＝At3－At2-1×V/(V＋S)，或R＝At3－ARBLK。

其中： Ati为i时刻的吸光度，ARBLK为试剂空白吸光度。

单试剂双波长终点法：基本上同“单试剂单波长终点法”，只是对于每一个测定周期，其实际吸光度等于Aλ1－Aλ2。

双试剂单波长终点法：t1时刻加入第一试剂(体积为V1)，t2时刻加入样本(体积为S)之后立即搅拌，t3时刻加入第二试剂(体积为V2) 并立即搅拌，t4时刻反应达到终点。t3-t2为孵育时间,t4-t3为测定时间。

在项目参数中，如果反应起始时间设为0，则反应度R=A时刻吸光度-双试剂空白吸光度。如果反应起始时间小于0，则反应度R=At4 -双试剂空白吸光度-t3到t2间设定点的吸光度×（V1＋S）/(V1＋S＋V2)。

双试剂双波长终点法：基本上同“双试剂单波长终点法”，只是对于每一个测定周期，其实际吸光度等于Aλ1－Aλ2。

固定时间法：又称为一级动力学法、二点动力学法等，指在一定的反应时间内，反应速度与底物浓度的一次方成正比，即v=k[S]。由于底物在不断的消耗，因此整个反应速度在不断的减小，表现为吸光度的变化越来越小。这类反应达到平衡的时间很长，理论上可以在任意时间段进行监测，但由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，必需经过一段延迟时间才能进入稳定反应期。

t1时刻加入试剂(体积为V)，之后测量试剂空白的吸光度，t2时刻加入样本(体积为S)，t3时刻反应稳定，t4时刻停止对反应进行监测；t2－t3为延迟时间，t3－t4为测定时间。

单波长反应度（单双试剂相同）：R=At4—At3

双波长反应度：R=（t4时刻主波长吸光度－t4时刻次波长吸光度）－（t3时刻主波长吸光度－t3时刻次波长吸光度）

动力学法：又称零级动力学法，指反应速度与底物浓度的零次方成正比，也就是与底物浓度无关。因此，在整个反应过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度(ΔA/min)与被测物的活性或浓度成正比。动力学法也被称为连续监测法；主要用于酶活性的测定。

实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反应的进行，底物消耗到一定程度后，反应速度不再为零级，因此，零级动力学法是针对于特定时间段而言的；同样，由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，必需经过一段延迟时间才能进入稳定反应期，各试剂商对这两段时间有严格规定。

t1时刻加入试剂(体积为V)，t2时刻加入样本(体积为S)，t3时刻反应稳定，tn时刻停止对反应进行监测；t3-t2为延迟时间，tn-t3为测定时间。单波长反应度（单双试剂相同）R＝（n∑AT－∑A∑T）/［n∑T2－（∑T）2］,其中：n＝t3到tn间的数据个数，T＝时间， A=某一时间的吸光度。双波长反应度基本同单波长，只是某一时间的吸光度等于主波长吸光度减去次波长吸光度。