全自动生化分析仪常用试剂间的相互干扰和应对措施

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      在使用全自动生化分析仪的过程中，我们经常会遇到这样的情况：单独做某个项目时结果没有问题，可是将它与某些项目组合在一起时，结果却出现异常。其中的原因是全自动生化分析仪的清洗系统随着仪器使用时间的累加，清洗效果逐渐下降，试剂交叉污染的程度增加所致。全自动生化分析仪各试剂间的相互干扰影响到了检验结果的准确性和可靠性，给检验结果带来很大的偏差，有时甚至会误导临床医生，延误患者的病情，造成严重后果。因此避免试剂间的干扰，在日常生化检验工作中也就非常重要和迫切。

一、试剂间相互干扰的类型　

试剂中含有下一个检测所要测定的底物，或是含有的某种试剂成分与下一反应的底物有作用，因而直接干扰下一反应的测定结果；另一种原因是该试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来间接的干扰，因为在有试剂污染的情况下，下一个测试所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。部分已知的常用试剂间可能产生的相互干扰如下：

 

1.pH值改变：试剂中反应缓冲液之间因仪器携带污染而使下一反应的pH值改变，使下一反应达不到最佳状态。如双缩脲法测血清总蛋白，若其他条件相同，反应在碱性(pH值8～9)条件时，蛋白肽键（—CONH）才都能与碱性铜溶液作用生成紫色反应，完全测出血清蛋白的总量。若pH＜8时，总蛋白测定结果偏低，直接影响球蛋白、白蛋白/球蛋白的结果。酶活力测定在最适pH值时，反应最快，灵敏度最高，但是因为缓冲能力有限，可因携带污染使酶促反应出现无效值。大多数酶反应pH值在6.0～7.5之间；ALP、γ-GT、LDH须在碱性条件下最适宜。

 

2.TG、T-CH、UA、MG试剂中含有胆酸盐，对循环酶法测定胆汁酸能产生严重干扰［1］。

         3.ALT（IFCC）、AST（IFCC）试剂中含有高活力LD成分，有可能会对LD的测定带来干扰。

 

 

4.CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）试剂中含有Glu成分，其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反应过程，因此可能对Glu测定带来干扰，尤其对Glu的HK法测定可能带来严重干扰。

5.Glu(HK)、CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）、TG、HDL-C、LDL-C(直接法)等试剂中使用了镁盐，可能会对其后的Mg2+ 测定带来干扰［2］；TP试剂中高浓度的Cu2+对Mg2+测定也会产生干扰［3］。

6.ALT、AST、LDH、CK、CK-MB、UA、r-GT、TP，LDH等试剂由于试剂中含有K+或者与K+的酶法测定有相同或相反的进程,对K+的酶法测定产生干扰［4］。

 

 

7.ChE(Butyrylthiocholine)、TC(ChOD-PAP)、Glu(GOD-PAP)、 UA(Uricase)、 α-HBDH(DGKC)等试剂使用磷酸缓冲液，可能会对无机磷的测定带来干扰。

8.Mg2+试剂 (Calmagite)中含有EGTA成分，为Ca2+络合剂，可能对Ca2+的测定带来干扰［5］。

9.CK检测不应在ALP、Ca检测之前，因CK反应液中加入EDTA-Na，能抑制ALP活性，结合Ca而使结果偏低。

10.BUN酶法测定因谷氨酸脱氢酶（GLDH）消耗NADH，不能放在底物NADH如ALT、AST项目前检测。

 

 

二、干扰的排查和发现

 

 

事实上各个厂家所提供的产品说明书常不能够全面反映试剂组成的情况，而生化反应的影响因素又是相当复杂的。因此，通过实验发现试剂交叉污染可能带来的干扰显得更加重要。具体可以通过以下几个试验来排查和发现试剂间可能发生的干扰。

1．将某一试剂作为样本进行全套项目测定，考察结果的情况，进而确定发生试剂交叉污染时造成直接干扰的项目；双试剂的R1、R2两种都要做，这样在解决干扰时有针对性。

2．1 份样本分为两份，一份加生理盐水或其他适当的稀释液，另一份加等量的试剂，同时测定、考察结果的变化，进而确定可能发生试剂交叉污染时造成干扰的项目［6］。

3．怀疑Ａ项试剂对Ｂ项目存在干扰，可以用样本先单做Ｂ项目若干次；然后先做Ａ项目，接着做Ｂ项目若干次。通过统计学分析，可以知道Ａ试剂通过试剂针对Ｂ项目的干扰程度。

三、干扰的消除

通过以上常见试剂间相互干扰的原因的分析及试剂干扰的排查的试验，应可以有针对性采取一些措施消除试剂间的干扰，常用的方法有下面几种：

1．为减少试剂间的相互干扰，应定期对仪器进行适当的保养，如更换管道，用去污剂、酸性洗液清洗比色杯，用去污剂擦清试剂针，用苯甲醇擦洗搅拌棒等。

2．合理安排检测项目的顺序：一般在安排项目顺序时要求两个项目间至少要有一个非干扰项目，而最彻底的做法则是将被干扰项目置于干扰项目之前，以消除干扰发生的可能。同时要求检验人员对仪器的工作状态要了如指掌，并在一个样本的项目选择或一个样本的最后一项与下一样本的第一个项目选择时对于试剂交叉污染的可能性加以考虑，合理安排项目顺序，以便得到更为合理的结果［7］。对常见的生化项目可以按以下顺序安排检测：P、Alb、DBIL、TBIL、K、Ca、CK、TBA、TG、AFU、ALT、CK-MB、APOA1、T-CH、APOB、Cl、HDL-C、LP（a）、AST、GPDA、AMY、LDL-C、BUN、UA、CHE、ADA、r-GT、Mg、Na、ALP、LDH、GPDA、TP、Cr。

3．一些生化分析仪还有额外的冲洗功能,可以在被干扰项目检测前对试剂针,比色杯用酸性洗液、碱性洗液进行２次或多次冲洗,以减少项目间的交叉污染。

4．有的全自动化分析仪器有不同的通道,可以将有干扰的项目排在不同的通道中检测。

 

5．选用具有抗交叉污染的试剂盒：如在游离胆固醇试剂中添加胆固醇酯抑制剂，以减少胆固醇酯酶水解胆固醇酯引起对游离胆固醇测定的污染。

 

 通过以上几种方法,大部分试剂间的交叉污染能够被解决,实际工作中，用全自动生化分析仪进行连续的多个项目的测定，每个反应的详细过程难以探知，因此要求我们在实际工作中必须对生化分析仪的工作原理，方法，流程，状态非常了解，还须对试剂的组成，反应原理作深入的分析，理论分析结合实际应用,方可以摸索出一套符合本单位工作的方法。