活化部分凝血活酶(APTT)时间测定

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活化部分凝血活酶时间测定(activeated partial thromboplasting time，APTT)，是检测“内源性途径”凝血因子缺陷的过筛试验，也是当前用于凝血因子治疗、肝素抗凝治疗监控以及检测狼疮抗凝物(一种抗磷脂自身抗体)的主要手段，其临床应用频率仅次于PT或与之相当。
    1  原理  
    在抗凝血浆中，加入足量的活化接触因子激活剂和部分凝血活酶(代替血小板的磷脂)，再加入适量的钙离子即可满足内源抗凝血的全部条件。从加入钙离子到血浆凝固所需的时间称为活化部分凝血活酶时间。AFTT的长短反映了血浆中内源凝血途径和共同途径中凝血因子的水平。本试验是目前最常用的敏感的检查内源凝血系统是否正常的筛选试验。   
    APTT是从复钙时间和部分凝血活酶时间(PTT)改良而来。它脑磷脂(比PT测定用的凝血活酶少了蛋白质部分，故名部分凝血活酶)作为血小板代替物，加到乏血小板血浆(PPP)中，同时加入了活化第Ⅻ因子的激活剂。较之PTT，其凝固时间缩短，并且排除了血小板数量和功能对血浆凝固的影响。
    2  仪器  
    本测定所用器材、设备(包括采血、贮血容器及加样装置)及要求，与PT完全相同，PT所用自动化仪器同样适用于本试验。
    3  试剂
    (1)部分凝血活酶试剂现有商品供应，有的已与激活剂按比例配在一起。常用的激活剂有硅藻土(商品名Celite)、白陶土、二氧化硅微粒、鞣花酸(ellagic acid)等，由厂方配套供应。 
APTT试剂与仪器结合，质量要求为选用Ⅷ、Ⅸ或Ⅺ因子血浆浓度为200～250 U／L(或<30％)时敏感的试剂。
    (2)氯化钙溶液(25 mmol／L)及其他试剂与PT所用者相同。
    4  标本采集与处理
    (1)样品的采取、贮存、运送基本与乏血小板血浆制备和PT测定相同。
    (2)接触活化时间：加激活剂活化Ⅻ因子的时间要保持一致。各仪器和试剂生产厂家的规定可能不一样，应严格按说明书要求进行。手工操作时，应用秒表或其他定时装置计时。
    5  操作步骤
    (1)最好用已加有定量枸橼酸钠溶液的专用硅化真空采血管按要求采集静脉血，或静脉采血1.8 ml，加入含有109 mmol／L枸橼酸钠溶液0.2 ml的试管中，充分混匀，3000转／分钟，离心10分钟，分离血浆。
    (2)试管中加入预温的健康人冻干血浆和APTT试剂各0.1 ml，混匀，37℃水浴中预温3分钟并轻轻振摇。
    (3)于上述试管中加入预温的25 mmol／L氯化钙溶液0.1 ml，混匀，并立即计时，置水浴中不断振摇20秒后，不时地缓慢倾斜试管，观察试管内液体的流动状态，当液体停止流动时停止计时，记录时间。
    (4)用同样方法测定待检血浆的APTT值。
    6  注意事项
    (1)采血要顺利，血液与抗凝剂要充分混匀，避免产生微小凝块。
    (2)采血后应尽快检测，最迟不应超过2小时，否则凝固时间有缩短的倾向。
    (3)血液离心速度要达到3 000 r／min，时间为10分钟，尽可能除去血小板，离心后血浆血小板计数应<20×109／L。
(4)血浆加APTT试剂后预温时间不应少于3分钟。
    (5)待检标本检测前应先测定健康人混合血浆，如果其APTT在允许范围内方能测定待检标本。否则，应重新配制APTY试剂。
    7  参考值  
    22～38秒。
    8  临床意义  
    基本与凝血时间意义相同，但敏感性高。目前所用的大多数APTT测定方法，凡当血浆凝血因子低于正常水平的15％～30％即可异常。

 

   (1)APTT延长：APTT结果超过正常对照10秒以上即为延长。APTT是内源凝血因子缺乏最可靠的筛选试验，主要用于发现轻型的血友病。虽可检出因子Ⅷ：C水平低于25％甲型血友病，但对于亚临床型血友病(因子Ⅷ>25％)和血友病携带者敏感性欠佳。结果延长也见于因子Ⅸ(血友病乙)、Ⅺ和Ⅶ缺乏症；血中抗凝物质如凝血因子抑制物或肝素水平增高时，凝血酶原、纤维蛋白原及因子V、X缺乏时也可延长，但敏感性略差；其他尚有肝病、DIC、大量输入库存血等时也可见APTT延长。 
    (2)APTT缩短：见于DIC，血栓前状态及血栓性疾病。
    (3)肝素治疗监护：APTT对血浆肝素的浓度很为敏感，故是目前广泛应用的实验室监护指标。此时要注意APTT测定结果必须与肝素治疗范围的血浆浓度呈线性关系，否则不宜使用。一般在肝素治疗期间，APTT维持在正常对照的1.5～3.0倍为宜。
    9  结果分析  
    临床常选用APTT和PT作为凝血功能的筛选试验，根据测定结果，大致有以下四种情况：
    (1)APTT和PT都正常：除正常人外，仅见于遗传性和继发性 FXIII缺乏症。获得性者常见于严重肝病、肝脏肿瘤、恶性淋巴瘤、白血病、抗因子XIII抗体、自身免疫性贫血和恶性贫血等。
    (2)APTT延长伴PT正常：多数由于内源性凝血途径缺陷所引起的出血性疾病。如血友病A、B，以及因子Ⅺ缺乏症；血循环中、有抗因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ抗体存在。
    (3)APTT正常伴PT延长：多数由于外源凝血途径缺陷所引起的出血性疾病，如遗传和获得性Ⅶ因子缺乏症。获得性者常见于肝脏疾病、DIC，血循环中有抗因子Ⅶ抗体存在和口服抗凝剂等。
    (4)APTT和PT都延长：多数由于共同凝血途径缺陷所引起的出血性疾病，如遗传和获得性因子X、V、Ⅱ和I缺乏症。获得性者主要见于肝脏疾病和DIC，口服抗凝剂时可有因子X和Ⅱ减低。此外血循环中有抗因子X，抗因子V和抗因子Ⅱ抗体存在时，他们也相应延长。临床应用肝素治疗时，APTTT和PT也都相应延长。