生化检验之校准

互联网2014-12-26

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1、校准（Calibration）的定义

在一定条件下的一系列操作来确认检测仪器和检测系统所指示的量值，或者某一物质，或者参考物质代表的值，与相应标准量值之间的关系。包括校准和校准验证两个方面。

2、校准的意义

确保检测系统的<a target="_blank">检验结果</a>在规定的报告范围内的稳定性和可靠性。

3、校准方法

1)、线性（Linear）法：

①、1点线性法（K系数法）：通过测定空白液（或第1标准液）的吸光度和输入的K值而得出工作曲线。

②、2点线性法：通过空白液（或第1标准液）和标准液（第2标准液）浓度与吸光度之间的关系，采用线性回归法制成线性工作曲线。

③、多点线性法：通过空白液（或第1标准液）和标准液（第2标准或第6标准液）浓度与吸光度之间的关系，采用线性回归法制成线性工作曲线。

④、同工酶法（线性法）：检测的样本中含有两种不同的同工酶，如果含有抑制剂的试剂不能完全抑制对检测有干扰的同工酶活性。采用同工酶法进行校准，可测定同工酶的总活性（同工酶P）和所检测同工酶的活性(同工酶Q)。

2）、非线性法：

①、Logit-log3P法：对数函数法中的一种，适用于随浓度的升高而吸光度表现为收束的工作曲线。“P”表示参数(parameter)之意，由3个参数（S1Abs、K、a）参与计算。 注：S1Abs表示试剂空白，K表示校准所得斜率，a表示近似常数。

②、Logit-log4P法：对数函数法中的一种，同样适用于随浓度的升高而吸光度表现为收束的工作曲线。由4个参数（S1ABS、K、a、b）参与计算。

③、Logit-log5P法：对数函数法中的一种，适用于随浓度的升高而吸光度表现为收束较明显的工作曲线。因该方法由5个参数（S1Abs、K、a、b、c）参与计算，而使结果更加精确。

④、指数函数法（Exponential）：该方法的工作曲线随着浓度的升高而吸光度出现离散的趋势。由5个参数（S1Abs、K、a、b、c）参与计算。

⑤、样条函数法（Spline）：是将每一标准液测定的吸光度值连接起来（点对点），形成一个完整曲线，即为曲线拟合。因该校准方法将测定误差也拟合到曲线中，所以曲线拟合优于折线法校准。由4个近似常数a(I)、b(I)、c(I)、d(I)参与计算，是用标准液I和I+1（I=1～ N-1）之间的曲线形状的参数来表示，通过Newton近似法求出浓度。

⑥、折线法（Line Graph）：是将标准液1～标准液6的吸光度值用多条直线连接起来的工作曲线。由S1Abs、K1；S2Abs、K2；S3Abs、K3；S4Abs、K4；S5Abs、K5参与计算。

图一：

图二：

4、校准方案的制定

1）、选择合适的校（标)准品，使用配套校准品，包括校（标)准品的数目、类型和浓度；

2）、尽量选用已溯源至参考方法和或参考物质的校（标)准品； 3）、确定校准的频度； 4）、同时还规定六个月以及有下列情况发生时，进行一次校准： ①、如检测系统进行过一次大的预防性维护或者更换了重要部件； ②、质控反映出异常趋势或偏移，或者超出了<a target="_blank">实验室</a>规定的接受限，采取一般性纠正措施后，仍不能纠正问题时； 5）、选择合适的校准方法。