显微摄影与显微照片制作

生物显微摄影(Microphotography)是利用显微摄影装置来拍摄显微镜视野中所观察到的物像。生物显微摄影技术是一项重要的技术，是再现显微视野中物象的最好方法，具有真实性和科学性。

暗室技术是在暗室中进行的 ，主要指胶片的冲洗，印相和放大技术。

显微摄影技术

1．工作前的准备

(1)光路系统的清洁

显微摄影必须保证光路系统的清洁，任何光学部件有了污垢及灰尘，均会影响照片的质量。各部件在擦拭时，只能清理表面，而不应任意拆卸。

(2)光轴中心的调整

显微摄影时光轴中心的调整是绝对不可忽视的，否则拍出的图象，各部分的感光不匀。

(3)其它准备工作

用观察目镜观察，先调好两眼的瞳距，使两个视场的象合二为一，再调节好两眼的屈光度以适应观察者的视力。

2． 视场光阑与孔径光阑的应用

在观察时根据物镜的倍率不同视场光阑开大或缩小而给予相应的光束面积，以达到镜检的优良效果。在显微摄影时它起着增加和减弱影象反差的作用。当视场光阑开大到一定程度时，照射到被摄物体上的光，即会产生反射与不规则的散射，造成影象反差的损失；当视场光阑收缩到取景框边缘的外方时，图象的反差就得到改善；视场光阑过度的收缩接近取景框，则图象的四角部分将被切去。因此，在显微摄影时，视场光阑的应用是重要的一个因素，应开启到比取景框稍大的位置。

3． 屈光度调节与调焦

利用取景侧目镜（聚焦望远镜）或取景目镜，首先进行屈光度的校正，旋转取景侧目镜或取景目镜上的视度圈，使取景框中的双十字线达到最清晰的程度。调节此圈可改变透镜间距，从而改变其焦距，可以补偿不同人眼视力的差别。每个人在使用前都需调节，应用同一只眼睛调节，不然两眼之间也会存在屈光度的差异。

屈光度调节完成后即可进行调焦，调焦时用取景目镜观察，将所要拍摄的部分移到取景框中，然后按显微镜的使用方法将显微镜调到最佳工作状态，使视野图像清晰，便可进行曝光。

4．光的补偿

拍摄显微照片时，根据被摄物体组织结构所占帧幅面积的百分比需要调节曝光补偿。在明场情况下，如果组织结构的各部分在帧幅内均匀分布，这样不论是平均测光还是点测光，都不需要曝光补偿；若被摄物体所占的面积小或分散，则需要进行曝光补偿，加长一些曝光时间，否则被摄物体的曝光不够。反之，在暗场情况下，物象是明亮的，在曝光的补偿上就需要减少一些曝光时间。

显微摄影操作步骤

1. 拍摄前准备

（1）光路合轴 使光轴与光束处于同一轴线上。

（2）柯勒氏照明 使观察的视野获得均匀而又充分的照明；防止杂散光对照相系统产生影响；使被摄物体不受热，影象清晰。

（3）物镜与目镜合理组合 依标本的不同和显微摄影要求，物镜与目镜的组合有一定规范。

（4）调整视场光阑和孔径光阑 使两者与所用物镜的数值孔径相等，所得的分辨力最高；视场光阑一旦调好，不要再动，而孔径光阑可随物镜数值孔径的更换，做相应的调整。

2. 拍摄程序

（1）开启相机后盖，安装胶卷于照相机内。

（2）打开显微镜照明装置的电源开关，将亮度调至适当。

（3）依个人的视力，调整摄影目镜视度圈至双“十”字线清晰。

（4）放一片需要拍摄的标本载玻片于载物台上。在低倍镜下选好要拍摄的核型或细胞结构，再转换到高倍镜下，聚焦标本细节，准备拍照。

（5）按下曝光按钮，曝光按钮亮表示曝光开始进行，熄灭表示曝光完毕。

（6）拍摄记录。

暗室技术

感光胶片在拍摄完毕后，需尽快在暗室中冲洗和晒印，其基本原理是显影液使胶片已感光的银盐潜影还原为可见的金属银影像；定影液把未被还原的卤化银溶去，晾干是便于胶片和相纸保存。

暗室技术操作步骤

1. 胶片的冲洗

(1)在全暗室中把胶片缠入显影罐，先用清水冲洗1～2分钟，排除气泡，然后再把水倒掉。

(2)从顶部罐口注入预先配好的约250ml D-72显影液。20℃显影4～6分钟。显影中轻轻摇动显影罐，使胶片表面充分受显影液作用，显影完毕，迅速倒出显影液。

(3)水洗1分钟左右，加入250ml的F-5定影液，20℃定影15分钟。取出胶片流水冲洗15分钟以上。

(4)将胶片挂起，用脱脂棉轻轻吸掉胶片表面过多的积水，晾干。

2. 底片的扩印

(1)胶片晾干后，用放大机的胶片夹子夹住胶片，药膜面朝下，聚焦取景，然后在红灯条件下，用压纸板压住所需号放大像纸，药膜面向上，进行曝光。
 
(2)曝光后的像纸，浸入D-72显影液中，然后不时用竹镊子夹住像纸翻动，直到显影适度为止。

(3)用水漂洗10～20秒，再浸入F-5定影液中处理15分钟，取出在流水中冲洗60分钟左右。

(4) 放在电热上光机上烘干；裁边，装入有说明的纸袋内保存。

来源：检验医学在线