【共享】有关抗体的保存

丁香园2015-06-29

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不同类型抗体的保存指南, 用以避免抗体污染或损伤请不时核查数据表以获取特定保存建议。如果恰当保存和处理, 大多数抗体应能保持活性数月乃至数年。

保存温度和条件

对于很多抗体而言, 分装成小等份并冻存于 -20℃ 或-80℃ 是最佳保存条件。分装成小等份可最大程度减少由冻融造成的损伤, 以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需冻融一次, 如有剩余, 可将剩余物保存于 4℃。在收到抗体时，在 10,000 × g 下离心20 秒以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液, 并以小等份转移至低蛋白结合微量离心管中。小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。小等份应不小于10μl；等份越小, 储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。

在大多数情况下, 抗体时在 4℃ 下保存一至两周, 然后再冷冻进行长期保存是可接受的, 但也许腹水液是例外, 它可能包含蛋白酶, 因而应该尽快冻存。同样, 遵照数据表上的建议是重要的。

酶偶联抗体不应冻存, 而应保存于 4℃。冻融不仅影响抗体结合能力, 还会降低酶活性。

无论偶联至荧光染料、酶还是生物素, 偶联抗体都应保存于深色试剂瓶中或用金属箔包裹。暴露于光线中将损害偶联物的活性。特别是荧光偶联物易受到光漂白影响, 在实验的所有阶段都应避光。

IgG3 同型抗体具有解冻时形成聚集物的独特趋势，应始终存于4℃。

 

为了防止微生物污染, 可将叠氮化钠加入抗体制备品中达到0.02%(w/v) 的终浓度

如果用抗体染色或处理活细胞, 或如果用抗体进行体内研究, 一定要使用不包含叠氮化钠的制备品。该抗菌剂也对大多数其它生物具有毒性: 它阻断细胞色素电子传递系统。

叠氮化钠会干扰氨基参与的任何偶联, 应在偶联进行前除去。偶联后, 抗体可保存于叠氮化钠中, 除此以外, 0.01% 硫汞撒 (硫柳汞) 不含伯胺, 也是可接受的替代物。

叠氮化钠可通过透析或凝胶过滤从抗体溶液中除去。IgG 的分子量为150,000 道尔顿 (IgM 为约600,000); 叠氮化钠的分子量为65 道尔顿。截留分子量为14,000 道尔顿的微透析装置可保留抗体同时使叠氮化物向外扩散。在保持于4℃ 的磁性搅拌器上的烧杯中，每毫升抗体使用至少一升冷 PBS 并搅拌透析装置6 小时。更换PBS 两次, 每次更换搅拌至少6小时。如有可能，所有材料都应灭菌并且所得的制备物应无菌操作。

冷冻/融化损伤

重复冷冻/融化循环可使抗体变性, 导致其形成使抗体结合能力降低的聚集物。保存于-20℃ 对于大多数抗体是适当的; 保存于-80℃ 无明显优势。冰箱不能为无霜型。这些冷冻和融化之间的循环 (以减少结霜) 恰恰是应该避免的。出于相同原因, 抗体试剂瓶应置于具有最小温度波动的冰箱区域, 例如朝冰箱后部放置而不是置于门架上。有些研究人员加入冷冻保护剂甘油达到50% 的终浓度以防止冷冻/融化损伤; 甘油可将凝固点降低至低于-20℃。虽然这对于很多抗体是可接受的, 但是只有一小部分我们提供的抗体测试了在该保存条件下的稳定性, 并且我们的保证仅适用于按数据表上推荐的方式保存的抗体。不建议将包含甘油的溶液保存于-80℃, 因为该温度低于甘油的凝固点。请注意甘油可被细菌污染。如果加入甘油或任何冷冻保护剂, 则应当小心操作, 以得到无菌制备物。应避免抗体在稀释至工作浓度后在4℃ 下保存超过一天。蛋白质在高浓度下保存时一般不易降解,理想的浓度为1 mg/ml 或更高。这是在抗体溶液中加入蛋白质例如BSA 作为稳定剂的理论基础。加入的蛋白质也有助于减少抗体因结合于容器壁上而造成的损失。对于打算进行偶联的抗体而言,由于稳定蛋白质会与抗体竞争, 降低了偶联的效率, 所以不应加入稳定蛋白质。