【交流】关于荧光与萤光

总有同学分不清荧光与萤光的概念，导致犯了很低级的错误，例如有人问我，为什么我把pGL转染细胞，荧光显微镜下看不到荧光那？又比如 做双荧光素检测时能不能用酶标仪检测，或者该用什么仪器测那？这都是分不清荧光与萤光的区别导致的。本文只给刚入门的师弟师妹看，大神们不要笑话。

荧光，英文fluorescence，是指绿色荧光蛋白以及其变体（EGFP,CFP,ECFP,YFP,EYFP,DsRED等等）在收到激发后发射出的特定频率的光，这是一个生物物理反应，类似于我们高中物理学的什么基态啦，跃迁啦之类的那一块。这家伙是得了炸药奖的。Clontech公司构建了大量荧光定位质粒，如pEGFP-N1，pDsRed2-N1，pDsRed-Monomer-C1等等。

萤光，英文luminescence，即发光或称生物发光，是指萤火虫荧光素酶，海肾荧光素酶等在底物存在（实际上还需要ATP,氧，辅酶A等，这些试剂盒中已经加入）下发出的光，是生物化学反应，他的实质是酶，没有底物是不能发光的。把LUC利用的最好的是PROMEGA公司，他们有大量试剂盒是基于这两种荧光素酶的，最常见的是检测启动子或增强子活性的双荧光素酶检测报告基因试剂盒（DLR）（真的很好使，你数据做不好是你没好好研究这个系统，没优化好质粒），还有做microRNA的系统。

对于检测仪器，绿色荧光蛋白等一个是检测静态的，观测用荧光显微镜，例如看看带有GFP标签的融合蛋白在细胞中的定位啦；另外一个是检测动态的，用荧光光度计来检测，如在FRET实验中测能量迁移，如果是多功能检测仪，这时就看仪器检测模式中有没有检测fluorescence（荧光）一项，不同的荧光蛋白激发光和发射光的频率各不相同，检测是要注意设置仪器参数，频率不同才有了不同颜色之分。
而luminescence萤光，检测的是酶促反应发射的在可见光范围内的总光量，因而没有设置频率一说。用化学发光仪（Luminometer）检测。
另外还有一个概念---光吸收（absorbance），是看溶液中物质对光的吸收量来测物质浓度的，就是一般单功能酶标仪干的活，说白了就是看溶液颜色深浅，颜色深的浓度大。
现在有公司生产的所谓多功能酶标仪，或者叫多标记微孔检测仪是同时具备以上三种光的检测能力的，一台顶过去五台，实验不费劲那种。我们使用的就是PE公司的EnVision 多标记微孔板检测仪，无论做ELISA，还是双荧光素酶检测报告基因，还是FRET证明多聚化都在这一台机器上进行。有条件最好买合订本的，原来测LUC用单功能的thermo产的Luminometer，那叫一个烦，5,6块96孔板用EP管一个一个测，一下午一动不动的还测不完（我最快纪录是36分钟一块板）。

另外需要提醒的是多孔板检测时无论LUC还是GFP都要用底壁不透明的白板，防止孔间干扰，可以在普通96孔板上转染，检测时移到这种白板上。