【旧帖整理】PFGE（脉冲电泳）

最近在做脉冲电泳，很感兴趣，本版战友wasteam曾于04年做过电泳方面的整理，其中提到过脉冲电泳，但当时有关帖子较少。现将后来的贴子重新整理，以便查找。 也希望版主能给予加分。
PFGE（脉冲电泳）

通常的琼脂糖凝胶电泳利用双链DNA 分子在电场作用下，在凝胶中的迁移率不同而达到分离的目的。当双链DNA分子超过一定的大小以后，DNA双螺旋的半径超过了凝胶的孔径，在琼脂糖中的电泳速度会达到极限，此时凝胶不能按照分子大小来筛分DNA。此时的DNA 在凝胶中的运动，是象通过弯管一样，以其一端指向电场的一极而通过凝胶。这样的迁移模式被形象的称之为“爬行”。
琼脂糖凝胶能分辨的DNA 分子的大小和凝胶孔径相关。低浓度的（〈0.2%）的凝胶可以分辨不大于750kb的DNA分子，但相对而言，这样的凝胶本身很脆弱，而且需要的电泳时间极长。对于超过750kb的样品，常用的电泳方法就无能为力了。
1984年，Schwartz和Cantor报道了脉冲场电泳的设计思想，解决了分离大片段DNA的方法。该方法在凝胶上加了正交的可变脉冲电场，使得DNA分子在“爬行”过程中，因为电场方向的变化，DNA分子以一种扭曲的状态运动，达到分离的目的。
脉冲场电泳经过数年的发展，已经成为一个非常成熟的分离大片段DNA 分子的技术。现在最常用的手段是CHEF技术和DR技术。
下面是脉冲场电泳简单的实验流程：
1、样品的制备：细胞、组织用低熔点琼脂糖包埋，做成琼脂糖胶块；
2、DNA 的释放：用细胞裂解液和蛋白酶K消化，使得DNA被释放到细胞外；
3、DNA 的消化：大片段的DNA用限制性内切酶消化；
4、上样和电泳：制备好的样品按照设计好的程序电泳；
5、染色和结果分析：电泳的结果通过染色后被读取，通过相关软件进行数据的分析。
这种电泳技术常用于建立染色体图谱，DNA文库构建，细菌的流行病学分型等。常用机器为BIO-RAD的CHEF MAP（too expensive）。

原理介绍
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一般步骤
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样品制备
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样品DNA降解的解决
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仪器操作
脉冲时间和电压的设置
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条带图形分析
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