【资源】RNA干扰
丁香园论坛
4228
<center>
<strong>RNA干扰</strong></center>
RNA干扰（RNA interference，缩写为RNAi）是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象，其机制是通过阻碍特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默。RNAi在基因沉默(silent gene)方面具有高效性和简单性，所以是基因功能研究的重要工具。
siRNA是一类长约21～25 个核苷酸的双链小RNA分子，可作为一种特殊引物,在RNA 依赖RNA聚合酶(RdRp) 作用下以靶mRNA 为模板合成dsRNA ,后者可被降解形成新的siRNA ;新生成的siRNA又可进入上述循环。新生的dsRNA 反复合成和降解,不断产生新的siRNA ,从而使靶mRNA 渐进性减少,呈现基因沉默现象.
RNA干扰实验
将制备好的siRNA和其表达载体转导至真核细胞中的方法主要有以下几种：磷酸钙共沉淀、电穿孔法、 DEAE- 葡聚糖和 polybrene 、机械法（显微注射和基因枪）、阳离子脂质体试剂，其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。
脂质体型转染
一、注意事项
1. 转染试剂的用量
2. siRNA（小干扰RNA）的用量
3. 转染时的细胞密度
4. 转染时的操作顺序
5. 细胞与转染试剂 /siRNA（小干扰RNA）复合物的温浴的时间
二、转染步骤
选用生理状态良好的细胞对提高转染效率很重要. siRNA和脂质体的用量和两者的比例可在推荐范围内适当调整。
1. 转染前一天， 将细胞接种在 6孔板上，24小时贴壁后细胞密度达到70%-90%；
2. 转染前，用基础培养基opti-MEM漂洗细胞2次，加入无血清基础培养基opti-MEM 1.5mL；
3. 将溶解后的siRNA稀释于250?l无血清的基础培养基opti-MEM中；取5-10ul脂质体混匀于250?l无血清的基础培养基opti-MEM中。静置5min；
4. 将脂质体稀释液及siRAN稀释液混合，轻轻混匀，室温放置20分钟；
5. 将脂质体-siRNA混合液加入细胞培养孔中；
6. 6小时后吸弃转染复合物，换入含10%胎牛血清的新鲜培养基；
7. 细胞在 CO2 培养箱中 37 ℃温育 24h-48h 后，进行转染后的其它检测步骤.
广州朗日生物技术有限公司是国内较大的对外提供技术服务的公司，致力于最前沿的生命科学技术研究。主要的研究方向有：肿瘤疾病，心血管疾病，内分泌类疾病，肾脏病学类疾病，干细胞，药物筛选等。技术中涉及的领域包括：细胞生物学、分子生物学、免疫与蛋白组学、动物模型构建、药物筛选和转基因小鼠等。并且成功建立细胞库，载体库，病毒库等，可以为广大生物医药企事业单位提供全方位的服务。并广泛提供分子生物学﹑细胞生物学等生命科学领域的实验整体技术服务及相关的科研指导，包括：实验课题的设计→实验技术的操作→数据的处理分析→文章的撰写，为广大的医学研究员解决科研工作中的繁琐问题，为在生命科学领域进行探索研究的客户创造有利条件。
广州朗日生物技术有限公司
联系电话：020-32052239
15902035909
Email:15902035909@126.com 13662395504@163.com
Web: http://www.langri888.com
RNA干扰（RNA interference，缩写为RNAi）是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象，其机制是通过阻碍特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默。RNAi在基因沉默(silent gene)方面具有高效性和简单性，所以是基因功能研究的重要工具。
siRNA是一类长约21～25 个核苷酸的双链小RNA分子，可作为一种特殊引物,在RNA 依赖RNA聚合酶(RdRp) 作用下以靶mRNA 为模板合成dsRNA ,后者可被降解形成新的siRNA ;新生成的siRNA又可进入上述循环。新生的dsRNA 反复合成和降解,不断产生新的siRNA ,从而使靶mRNA 渐进性减少,呈现基因沉默现象.
RNA干扰实验
将制备好的siRNA和其表达载体转导至真核细胞中的方法主要有以下几种：磷酸钙共沉淀、电穿孔法、 DEAE- 葡聚糖和 polybrene 、机械法（显微注射和基因枪）、阳离子脂质体试剂，其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。
脂质体型转染
一、注意事项
1. 转染试剂的用量
2. siRNA（小干扰RNA）的用量
3. 转染时的细胞密度
4. 转染时的操作顺序
5. 细胞与转染试剂 /siRNA（小干扰RNA）复合物的温浴的时间
二、转染步骤
选用生理状态良好的细胞对提高转染效率很重要. siRNA和脂质体的用量和两者的比例可在推荐范围内适当调整。
1. 转染前一天， 将细胞接种在 6孔板上，24小时贴壁后细胞密度达到70%-90%；
2. 转染前，用基础培养基opti-MEM漂洗细胞2次，加入无血清基础培养基opti-MEM 1.5mL；
3. 将溶解后的siRNA稀释于250?l无血清的基础培养基opti-MEM中；取5-10ul脂质体混匀于250?l无血清的基础培养基opti-MEM中。静置5min；
4. 将脂质体稀释液及siRAN稀释液混合，轻轻混匀，室温放置20分钟；
5. 将脂质体-siRNA混合液加入细胞培养孔中；
6. 6小时后吸弃转染复合物，换入含10%胎牛血清的新鲜培养基；
7. 细胞在 CO2 培养箱中 37 ℃温育 24h-48h 后，进行转染后的其它检测步骤.
广州朗日生物技术有限公司是国内较大的对外提供技术服务的公司，致力于最前沿的生命科学技术研究。主要的研究方向有：肿瘤疾病，心血管疾病，内分泌类疾病，肾脏病学类疾病，干细胞，药物筛选等。技术中涉及的领域包括：细胞生物学、分子生物学、免疫与蛋白组学、动物模型构建、药物筛选和转基因小鼠等。并且成功建立细胞库，载体库，病毒库等，可以为广大生物医药企事业单位提供全方位的服务。并广泛提供分子生物学﹑细胞生物学等生命科学领域的实验整体技术服务及相关的科研指导，包括：实验课题的设计→实验技术的操作→数据的处理分析→文章的撰写，为广大的医学研究员解决科研工作中的繁琐问题，为在生命科学领域进行探索研究的客户创造有利条件。
广州朗日生物技术有限公司
联系电话：020-32052239
15902035909
Email:15902035909@126.com 13662395504@163.com
Web: http://www.langri888.com
