【求助】恳请推荐绿色荧光蛋白的真核表达载体
丁香园论坛
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各位高手:
小的新手上路,恳请各位不吝指导。小的想用带有绿色荧光蛋白的真核表达载体将一个长度在600-1000bp的cDNA和一段长度几十个bp的shRNA转染入人类的细胞中,希望目的基因能够比较稳定的表达,并且使得细胞能在激光共聚焦显微镜下显示绿色。能否恳请各位分别为推荐cDNA和shRNA各推荐一种比较常用的、可行性比较好的、不太容易发生意外情况的带有绿色荧光蛋白的真核表达载体呢?多谢各位了!
小的新手上路,恳请各位不吝指导。小的想用带有绿色荧光蛋白的真核表达载体将一个长度在600-1000bp的cDNA和一段长度几十个bp的shRNA转染入人类的细胞中,希望目的基因能够比较稳定的表达,并且使得细胞能在激光共聚焦显微镜下显示绿色。能否恳请各位分别为推荐cDNA和shRNA各推荐一种比较常用的、可行性比较好的、不太容易发生意外情况的带有绿色荧光蛋白的真核表达载体呢?多谢各位了!
pEGFP-N1
你用的什么细胞啊,要稳转,细胞系的话用逆转录病毒就可以,如pMSCV,不知道有没有GFP的 ,不过可以自己加GFP。如果是原代细胞的话感觉最好还是慢病毒,公司买现成的,自己做太麻烦
谢谢两位兄弟,质粒的载体就可以了。只是不知道表达出来的GFP是不是和目的基因连在一起的融合蛋白?融合入蛋白会不会影响原目的基因的性能?
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师兄微信号:shixiongcoming