【求助】有关shRNA抑制NF2基因的问题
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Lentivirus shRNA-mediated Knockdown of NF-2
FG12 lentiviral vector, with an independent open reading frame of green fluorescence protein (GFP), was used to produce small, double-stranded RNA (siRNA) to inhibit target gene expression in targeting cells. To construct the hairpin siRNA expression cassette, complementary DNA oligonucleotides for siRNA of human NF-2
(NF-2 sh1 and NF2 sh2) were synthesized, annealed, and inserted into FG12.
请问下为什么要制作2条 NF-2 shRNA(NF-2 sh1 and NF2 sh2)的cDNA ?
FG12 lentiviral vector, with an independent open reading frame of green fluorescence protein (GFP), was used to produce small, double-stranded RNA (siRNA) to inhibit target gene expression in targeting cells. To construct the hairpin siRNA expression cassette, complementary DNA oligonucleotides for siRNA of human NF-2
(NF-2 sh1 and NF2 sh2) were synthesized, annealed, and inserted into FG12.
请问下为什么要制作2条 NF-2 shRNA(NF-2 sh1 and NF2 sh2)的cDNA ?
一般做敲除实验最好多设计几个siRNA或者shRNA，因为防止off-target发生，如果两个的现象一样说服力更强
jawonderful wrote:
一般做敲除实验最好多设计几个siRNA或者shRNA，因为防止off-target发生，如果两个的现象一样说服力更强
请问下 这两个shRNA的序列是一样的吗？ 或者换种问法序列 是怎么得到的？ 是根据互补 要阻断基因的mRNA正义链和反义链两条 得到的吗
可以用软件设计siRNA序列，其实shRNA就是把siRNA的两条链中间加上一定的碱基后在克隆到shRNA载体中的，具体的你可以去参考clonetech的相关产品说明书。另外一个途径就是在公司直接购买，很多公司譬如qiagen会有预先设计好的siRNA卖，当然如果是针对某个很新的基因就不会有预先设计好的。openbiosystem，santa cruz都有shRNA卖
jawonderful wrote:
可以用软件设计siRNA序列，其实shRNA就是把siRNA的两条链中间加上一定的碱基后在克隆到shRNA载体中的，具体的你可以去参考clonetech的相关产品说明书。另外一个途径就是在公司直接购买，很多公司譬如qiagen会有预先设计好的siRNA卖，当然如果是针对某个很新的基因就不会有预先设计好的。openbiosystem，santa cruz都有shRNA卖
谢谢
做不同的shRNA,它 的干扰效果是不同的，有的高，有的低的,还需要去筛选比较的。qq24289096.
臭臭的小窝628 wrote:
做不同的shRNA,它 的干扰效果是不同的，有的高，有的低的,还需要去筛选比较的。qq24289096.
感谢
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