【求助】真菌DNA提取
丁香园论坛
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我现在做的是真菌DNA提取,后面用来做PCR的模板,用的是生工的提取盒。
今天刚刚做了,不知道做的对不对?最后出来的是一点点像白色沉淀似的东西,然后我用TE缓冲液溶解,但是不知道怎么样属于溶解好了。而且如何测定DNA的浓度呢?
我用的是液体培养基,但是不知道怎样把菌丝取出来,想请教一下各位,怎样在液体培养基上取出菌丝?
今天刚刚做了,不知道做的对不对?最后出来的是一点点像白色沉淀似的东西,然后我用TE缓冲液溶解,但是不知道怎么样属于溶解好了。而且如何测定DNA的浓度呢?
我用的是液体培养基,但是不知道怎样把菌丝取出来,想请教一下各位,怎样在液体培养基上取出菌丝?
真菌DNA的溶解和浓度测定应该与质粒一样道理。高速离心或滤膜过滤可以获得菌丝。
不好意思,高速离心到底怎么做啊?转速多少?多长时间?是不是将整个的液体培养基倒入EP管中?离心以后取哪部分?
真菌菌丝一般 用12000 rpm,4℃离心5 min左右就可以了把。
还有一种办法就是直接用冷冻干燥的方式将菌液冻干,效果也不错。
DNA浓度可以用微量的风光光度计测定吧,或者通过电泳分析之后与MARKER的亮度进行比较分析个大概。。因为MARKER的浓度是确定的。
还有一种办法就是直接用冷冻干燥的方式将菌液冻干,效果也不错。
DNA浓度可以用微量的风光光度计测定吧,或者通过电泳分析之后与MARKER的亮度进行比较分析个大概。。因为MARKER的浓度是确定的。
是不是将整个的液体培养基倒入EP管中?离心以后取哪部分?
为什么要在4℃离心?
为什么要在4℃离心?
离心后肯定要的是沉淀啊,菌体大部分在沉淀一层的
DNA的浓度和纯度怎么计算啊?我查文献说用紫外分光光度计,但是只有样品没有标准品怎么做呢?
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