【求助】p-AKT的检测时间

向各位战友求教：看过多篇英文文献，关于p-AKT的western blot检测时间，有的为1-2小时，有的却有24小时，差别之大，想知道原因。见到以前战友问过类似问题，可是关于这个时间点的把握始终弄不明白，还望实验室大虾不吝指教！

啊？我们就是用常规做法。。

检测的效果还可以啊~你的检测时间是什么概念啊？

就是用WB检测p-AKT的时间，有的paper是0，30，60，120分钟，看这段时间的p-AKT的变化，有的却是检测24小时的p-AKT，我对于这个时间检测不是很懂，请赐教！

我也正要做这方面的实验呢，想请教一下楼主，最后你的时间是如何确定的呀？

磷酸化水平很快的，5分钟就可以检测到了，30分钟达到峰值，可以持续一段时间，但具体看你用什么方法处理，EGF活化AKT很快，胰岛素处理活化时间更快

一般而言，在测定cell lines里面p-akt的水平时候，30min就可以了。
比如文献“The time course of Akt and ERK activation on XIAP expression in HEK 293 cell line”

但是，有的情况下，是从动物体内直接取样，然后做p-akt水平的测试。比如文献“
Extranuclear Estrogen Receptors Mediate the Neuroprotective Effects of Estrogen in the Rat Hippocampus“


这里，作者测试了很多时间段的p-akt
但是大家注意。在这里，researchers因为是直接从兔子体内取样的，才测试了3h，6h,24h这些时间段的p-akt水平。
在原文的method部分的”Sample preparation“之中，researchers做了说明，描述如下：”The rats were sacrificed under anesthesia at 10, 30min, 3h, 6h or 1 day after ischemia.“在不同的时间，杀兔子取样。
所以，一个是动物上的p-akt检测，一个是细胞株上的p-akt检测，完全不同。
本人是selleckchem的技术支持，有信号转导的问题，大家可以交流下。有空支持下我的blog，
pi3kaktblog.com
顺便上传提到的2篇文献的全文，供大家参考。