【讨论】验证是否为mRNA的方法
丁香园论坛
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本人刚用了提poly(A)尾RNA的盒子提了mRNA，扩了内参（b-actin），有条带，但不知道怎么样才能证明就是mRNA，求高手指点
能不能跑一下PAGE胶，看看条带位置啊？
谢谢您的回复~~跑了普通的0.7%非变性琼脂糖凝胶电泳，但出来了三条带，跟totalRNA 的位置相似
wlh0369 wrote:
能不能跑一下PAGE胶，看看条带位置啊？
谢谢您的回复~~跑了普通的0.7%非变性琼脂糖凝胶电泳，但出来了三条带，跟totalRNA 的位置相似
xan36 wrote:
本人刚用了提poly(A)尾RNA的盒子提了mRNA，扩了内参（b-actin），有条带，但不知道怎么样才能证明就是mRNA，求高手指点
你的引物有没有跨内含子？
如果是的，那产物拿去测序验证好了，这个是金标准。
或者做一个巢式PCR，内外侧的扩增产物bp数跟预期都相同，那一般就错不了
zjubell wrote:
你的引物有没有跨内含子？
如果是的，那产物拿去测序验证好了，这个是金标准。
或者做一个巢式PCR，内外侧的扩增产物bp数跟预期都相同，那一般就错不了
谢谢您的回复！
我是已知一条RNA上的一段片段，现在想得到其全长序列，不知道该采取什么办法。现在是想证明它就是mRNA，然后就可以直接做RACE了。请问，如果不是mRNA的话，有什么好的方法得到其全长序列吗？
从结果上看，你的mRNA似乎很不纯，有大量rRNA和tRNA存在，所以我建议你用poly(T)作为引物做一下RT，再用RNA酶消化样品，最后用特异引物做PCR得到全长
bigbang_0_0 wrote:
从结果上看，你的mRNA似乎很不纯，有大量rRNA和tRNA存在，所以我建议你用poly(T)作为引物做一下RT，再用RNA酶消化样品，最后用特异引物做PCR得到全长
好的，谢谢
路过，顶！
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