【求助】分子机制研究方法
丁香园论坛
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发现一个基因在某肿瘤细胞系中表达下调,下一步若做机制研究,可用哪些方法?新手,请各位高手多指点!
没有人帮忙吗?提供一个方向就行了,不需太具体。
我来说说看:
首先,确认是蛋白质水平的下调还是mRNA水平的下调,可以通过western blot和real time RT-PCR来初步确认一下。
如果是mRNA水平上就出现下调,那么比较有可能的是这个基因是受这个癌肿瘤的某个信号通路或者是转录因子调控,从而影响它的转录。具体是哪条通路或者是哪几条通路就要多看看paper还有做实验来看了。
如果是mRNA水平没有影响,只影响蛋白质水平,那么有可能是蛋白质翻译后修饰或者是蛋白质降解引起的,也是多看看分析一下有可能的降解或者是修饰的途径。
另外你再查查有没有这个蛋白与其他蛋白的相互作用研究,可以大致预测是哪条通路。如果没有人做过你就发达了~~
还有可以看看你研究的肿瘤中是否有发现类似的报道。有个病理上模型的支撑就更加好了。
首先,确认是蛋白质水平的下调还是mRNA水平的下调,可以通过western blot和real time RT-PCR来初步确认一下。
如果是mRNA水平上就出现下调,那么比较有可能的是这个基因是受这个癌肿瘤的某个信号通路或者是转录因子调控,从而影响它的转录。具体是哪条通路或者是哪几条通路就要多看看paper还有做实验来看了。
如果是mRNA水平没有影响,只影响蛋白质水平,那么有可能是蛋白质翻译后修饰或者是蛋白质降解引起的,也是多看看分析一下有可能的降解或者是修饰的途径。
另外你再查查有没有这个蛋白与其他蛋白的相互作用研究,可以大致预测是哪条通路。如果没有人做过你就发达了~~
还有可以看看你研究的肿瘤中是否有发现类似的报道。有个病理上模型的支撑就更加好了。
非常感谢!看了您的回答感觉思路清晰了许多。
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