【讨论】抗体和那些不能说的"秘密"-抗体选择的PASS标准 (请加精)

抗体，是我们非常熟悉的一种生物试剂， 但我们对抗体的鉴定，选择又了解多少呢
某著名抗体公司的科学家在行业内提出全新的抗体选择标准“PASS”。通过客观的参数指
标和专家的观点，科研人员只需要仔细的阅读抗体的说明书，再结合 “PASS”的抗体选择
标准，就可以在一定程度上自己鉴定选择抗体的品质。

“PASS”抗体选择标准是指科研人员在选择抗体的时候，应留意抗体说明书中抗体纯化工
艺（Purification），抗原信息（Antigen），抗体的特异性（Specificity）以及抗体的
种属来源（Species）这四个方面的相关信息。

Purification
抗体的优劣，包括特异性，效价等方面和生产抗体过程中使用的纯化工艺是直
接相关。但科研人员在选择抗体的时候去常常忽略这个方面。

在行业内，使用蛋白A或G纯化单克隆抗体的方法被广泛接受。那么，多克隆抗体纯化工艺
呢？

很多公司都使用亲和纯化（affinity purification）的方法来纯化多克隆抗体，该技术的
关键在于使用的亲和原（affinity ligand）。 为了得到效价更高，特异性更好的抗体，
一流的抗体公司尽可能使用全蛋白做为亲和原去得到优质的抗体，而且常常还会进行第二
步的蛋白A或G的分化。相反，使用多肽作为亲和原，纯化到的多抗表位有限，多抗的效价
和特异性都会大打折扣。

因此， 一流的抗体公司的多克隆抗体的效价，特异性的优势明显，而且很多多克隆抗体可
以用于中和和阻断实验。

专家观点
哥本哈根大学Dr.John Couchman认为优质抗体，尤其是多抗，应该是2步纯化：
Not only must I affinity purify the antibody but also perform antigen
adsorption on my tissues sections. Unfortunately, many commercial antibodies
are not affinity purified from serum.

哈佛大学神经学院的主任Dr. Clifford Saper在公开发表的文章中指出经过抗原亲和纯化
的抗体的特异性更好：
Affinity purify antisera by running them over a column to which the antigen is
fixed to a support matrix. Such antisera are less prone to artifact and tend
to have lower background staining.

Antigen
抗原作为抗体生产的“原材料”之一，对于抗体质量的影响自然不言而喻。

目前用于抗体生产的抗原主要有两种：一种是使用仪器合成的不具备生物活性的多肽。使
用多肽作为抗原的有三个缺点：(1) 使用多肽来源的抗体所做的实验结果重复性较差；(2
) 因为很多公司并不提供作为抗原的多肽序列信息，因此对发表论文或者科研数据方面都
有潜在的风险；(3) 一般而言，较活性全蛋白来源的抗体，多肽来源的抗体的特异性和效
价都比较低。

一流的抗体公司坚持使用具有活性的全蛋白作为抗原，由此得到的抗体效价，特异性和可
重复性方面更胜一筹。由此得到的抗体自然识别样本的能力和准确性也更高。

专家观点
科研人员认为对于那些不提供多肽信息的抗体，科学界是应该抵制的。
The antigen is not clearly stated。 Sometimes for “proprietary” reasons,
details on the antigen are withheld. This is not good science, and we should
boycott those antibodies.

依然是哈佛大学研究人员的观点：使用那些没有多肽信息的抗体是难以得到可重复的实验
结果，也不适合于严谨的科学研究。
Several manufactures have claimed that sequence information on the antigen was
“proprietary,” and they would not provide it. Because work using these
antibodies is inherently not repeatable, such papers are not acceptable for
publication.

Some companies are well-known for keeping the exact sequence of the immunizing
peptide as a “trade secret”. Investigators should be aware that such
antisera are not fit for use in serious scientific work.

哈佛大学的Clifford Saper教授在公开发表的文章中更是直接指出：
永远不要购买没有抗原信息的抗体，这样的研究成果既不科学，也不能被发表！
Never buy antibodies for which the manufacturer will not disclose the
structure of the immunizing antigen. These reagents are not fit for scientific
work, and the work you do with them will not be publishable.

Specificity
抗体的非特异性反应是长期困扰科研人员的一个难题。抗体识别非目的蛋白，造成假阳性
的情况。

几年前很多科研工作者都使用一个公司生产的anti-hTERT antibody并发表了像Cancer
Research等高影响因子的论文约20篇。但后来法国和中国的研究人员无意中发现这个抗体
实际上识别的是另外一个叫做nucleolin 的蛋白，并非hTERT，并将验证的工作发表在200
6年的Journal of Cell Science.

很多抗体公司几乎不去对那些同源性很近的蛋白，或者同一个蛋白家族的其他成员去做一
些抗体的交叉反应测试，因此抗体的非特异性结合时常发生。这无异于是在科研的过程当
中埋下了一枚定时炸弹。

除了上述的抗体纯化工艺，和全蛋白来源抗原的抗体的保证， 一流的抗体公司会时常检测
抗体的交叉反应，相关信息可以查询产品的说明书或者咨询抗体公司的技术人员。

专家观点
抗体所识别的蛋白，可能并不是免疫动物是所使用的的抗原蛋白。
Antibodies are biological agents, not standard chemical reagents. Antibodies
may bind to a wide variety of antigens other than the one that they were
raised to recognize.

Species
抗体的种属来源其实也是决定抗体质量的一个重要因素。

多克隆抗体的来源一般则是兔子或者是山羊。那么兔子和山羊来源的多抗有什么区别呢？
兔子的很容易染病，免疫系统因此也不稳定。 作为生产抗体的“工厂”，免疫系统的不稳
定必然会对于产生的抗体起来负面的影响。 此外，此为兔子的体积较小，每次的采血量有
限，兔子之间的个体差异和血样差异也可能对抗体批次的造成一些影响。

专家观点
兔子因为体积小，每次产生抗体的量是极其有限的，一方面对于同一只兔子，因为不同的
免疫时间，所以产生的抗体是有差异的；另一方面即使在同一个免疫时间，不同兔子因为
个体的差异，产生的抗体也是不一样的。因此，相比较兔子，山羊来源的抗体显然质量更
稳定，批次之间的差异更小。
Because bleeds from rabbits are limited in volume, a given manufacturer may
run out of a particular bleed, and substitute another bleed from the same
animal, or a bleed from a difference animal …… Quite often the new bleeds
have not been checked to make sure that they stain the same thing.

谢谢，长知识了。

能不能多一些关于选购抗体的办法啊？