【求助】LY 294002中的DMSO
丁香园论坛
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最近在做细胞内信号转导通路PI-3K-Akt，关于它的抑制剂LY 294002的配制，说明书上写用DMSO，在做实验时设了vehicle（含等量DMSO）组，但发现DMSO对细胞（小胶质细胞）有影响，且DMSO与干预药有协同作用，MTT结果显示DMSO浓度>=0.1%即对细胞造成损伤，而任何浓度DMSO（0.01%~0.1%）都与干预药有协同作用，乙醇的结果亦如此。所以想请教，大家在配LY时是怎么配的？在使用LY时是否遇到了上述问题？
I have never had this problem when I used LY 294002.
"as an alternative to DMSO try methanol (solubility up to ~1 mg/ml); if it meets your concentration for use in cell culture it is to prefer instead of DMSO (up to 0.5 % to use but you have control if DMSO makes site effects)"
You may check the following website for more detailed information.
"as an alternative to DMSO try methanol (solubility up to ~1 mg/ml); if it meets your concentration for use in cell culture it is to prefer instead of DMSO (up to 0.5 % to use but you have control if DMSO makes site effects)"
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谢谢ylhuang0502提供的信息。但不知上述话引自何处？
因为LY不溶于水，所以说明书让用DMSO或乙醇配，倒没提甲醇，也许可以尝试一下。看园子中的帖子，大家似乎也都是用DMSO配的，好像也未出现上述问题。据我所之，DMSO的作用靶点与ATP有关，而我们的干预药恰好是ATP，不知是否是此原因产生了协同作用，但乙醇又如何解释呢？不知ylhuang0502有何高见？
因为LY不溶于水，所以说明书让用DMSO或乙醇配，倒没提甲醇，也许可以尝试一下。看园子中的帖子，大家似乎也都是用DMSO配的，好像也未出现上述问题。据我所之，DMSO的作用靶点与ATP有关，而我们的干预药恰好是ATP，不知是否是此原因产生了协同作用，但乙醇又如何解释呢？不知ylhuang0502有何高见？
olivial 战友，非常抱歉，上次发帖，由于太匆忙，忘了将链接贴出，上贴提到的是有google出来的，来源自protocol-online论坛，虽然不是发表在论文上，但起码是个参考。
http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/21370.html
LZ提到“据我所之，DMSO的作用靶点与ATP有关，而我们的干预药恰好是ATP，不知是否是此原因产生了协同作用，但乙醇又如何解释呢？”
您提出了一个很有意思，也很有广泛意义的问题，从LZ以上叙述可以看出LZ做学问一定非常认真，很让我佩服，为表示我虚心学习LZ的刨根问底的精神，我也做了一些相关researach.主要结果如下：
1. DMSO确实可以影响ATP的含量和蛋白合成，参考文献为：NILSSON JR. Effects of Dimethyl Sulphoxide on ATP Content and Protein Synthesis in Tetrahymena， Protoplasma 103, 189--200 (1980), 但该文用的DMSO的浓度相当高，分别为 2.5% 和 7.5%，通常我们用的浓度都是在0.1%，要远远低于上述浓度。
2. 你所说的加入DMSO后的协同作用，我觉得未必是由于和上述的可能影响ATP的含量相关，一个合理的解释是有于“DMSO enhances the bioavailability of many substances (it has the capability to transport many therapeutic substances across the body's Cell Membranes without altering the integrity of Cell Membranes). By increasing their bioavailability, DMSO permits a lower dosage of some drugs than would otherwise be required.”。这段英文出自：
http://health.centreforce.com/health/DMSO.html
我就不翻译了，相信LZ一定能理解，另外上述网址可以说是DMSO的百科全书，各种有关DMSO的 参数非常非常齐全。
3. DMSO的靶点肯定不止一个，比如“DMSO inhibits the release of Cholinesterases (i.e. it possesses similar properties to Pharmaceutical Anticholinesterases）”，同样参见上面网址。
4. 至于乙醇，很可能作用靶点就更多啦，大概是由于这个世界酗酒的人太多了，所以研究乙醇的文章也特别多，在Pubmed上居然有多达113756篇有关乙醇的论文，有关DMSO虽然也有20672篇，但估计绝大多数仅仅是作为溶剂出现的。
http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/21370.html
LZ提到“据我所之，DMSO的作用靶点与ATP有关，而我们的干预药恰好是ATP，不知是否是此原因产生了协同作用，但乙醇又如何解释呢？”
您提出了一个很有意思，也很有广泛意义的问题，从LZ以上叙述可以看出LZ做学问一定非常认真，很让我佩服，为表示我虚心学习LZ的刨根问底的精神，我也做了一些相关researach.主要结果如下：
1. DMSO确实可以影响ATP的含量和蛋白合成，参考文献为：NILSSON JR. Effects of Dimethyl Sulphoxide on ATP Content and Protein Synthesis in Tetrahymena， Protoplasma 103, 189--200 (1980), 但该文用的DMSO的浓度相当高，分别为 2.5% 和 7.5%，通常我们用的浓度都是在0.1%，要远远低于上述浓度。
2. 你所说的加入DMSO后的协同作用，我觉得未必是由于和上述的可能影响ATP的含量相关，一个合理的解释是有于“DMSO enhances the bioavailability of many substances (it has the capability to transport many therapeutic substances across the body's Cell Membranes without altering the integrity of Cell Membranes). By increasing their bioavailability, DMSO permits a lower dosage of some drugs than would otherwise be required.”。这段英文出自：
http://health.centreforce.com/health/DMSO.html
我就不翻译了，相信LZ一定能理解，另外上述网址可以说是DMSO的百科全书，各种有关DMSO的 参数非常非常齐全。
3. DMSO的靶点肯定不止一个，比如“DMSO inhibits the release of Cholinesterases (i.e. it possesses similar properties to Pharmaceutical Anticholinesterases）”，同样参见上面网址。
4. 至于乙醇，很可能作用靶点就更多啦，大概是由于这个世界酗酒的人太多了，所以研究乙醇的文章也特别多，在Pubmed上居然有多达113756篇有关乙醇的论文，有关DMSO虽然也有20672篇，但估计绝大多数仅仅是作为溶剂出现的。
谢谢ylhuang0502站长提供的宝贵资源！
ylhuang0502站长过奖了，是因为实验中遇到了这样的问题，所以就不得不研究一下了。我想是因为DMSO是脂溶剂，而细胞膜又是磷脂双分子层，所以临床上才把一些治疗药物溶于DMSO，以增加细胞内药物的浓度和生物利用度，而DMSO本身对药或是细胞应该是没有影响的。
之所以提到ATP，是因为现在做PI-3K-Akt通路的人应该也不少，但似乎都没有遇到我们的问题，而前几天在pubmed上看到3篇文章，作者也是因为DMSO而纠结了好久（我觉得）。作者本是想研究二氮嗪（DMSO作为溶剂）对脑缺血的保护作用，开始得出的结论是可改善学习记忆能力（Morris water maze),但后来想到DMSO的干扰，将DMSO换成了NaOH，结果无统计学差异，原本看到的二氮嗪改善学习记忆能力竟是DMSO的作用！而二氮嗪刚好是“mitochondrial ATP-sensitive K+ channel opener”。而其他文章并未看到这种协同作用。所以初步怀疑是干预药的问题。具体文献参照：
1.Post-ischemic administration of diazoxide attenuates long-term microglial activation in the rat brain after permanent carotid artery occlusion.
2.Diazoxide and dimethyl sulphoxide alleviate experimental cerebral hypoperfusion-induced white matter injury in the rat brain.
3.Diazoxide and dimethyl sulphoxide prevent cerebral hypoperfusion-related learning dysfunction and brain damage after carotid artery occlusion.
总之，通过这次实验，看到了设vehicle组的重要性，同时对DMSO这类脂溶剂有了更深的认识，在使用它们作为药物溶剂时，要时刻想着它们在其中可能起的干扰作用！而我们的实验问题要如何解决也要再考虑一下。
ylhuang0502站长过奖了，是因为实验中遇到了这样的问题，所以就不得不研究一下了。我想是因为DMSO是脂溶剂，而细胞膜又是磷脂双分子层，所以临床上才把一些治疗药物溶于DMSO，以增加细胞内药物的浓度和生物利用度，而DMSO本身对药或是细胞应该是没有影响的。
之所以提到ATP，是因为现在做PI-3K-Akt通路的人应该也不少，但似乎都没有遇到我们的问题，而前几天在pubmed上看到3篇文章，作者也是因为DMSO而纠结了好久（我觉得）。作者本是想研究二氮嗪（DMSO作为溶剂）对脑缺血的保护作用，开始得出的结论是可改善学习记忆能力（Morris water maze),但后来想到DMSO的干扰，将DMSO换成了NaOH，结果无统计学差异，原本看到的二氮嗪改善学习记忆能力竟是DMSO的作用！而二氮嗪刚好是“mitochondrial ATP-sensitive K+ channel opener”。而其他文章并未看到这种协同作用。所以初步怀疑是干预药的问题。具体文献参照：
1.Post-ischemic administration of diazoxide attenuates long-term microglial activation in the rat brain after permanent carotid artery occlusion.
2.Diazoxide and dimethyl sulphoxide alleviate experimental cerebral hypoperfusion-induced white matter injury in the rat brain.
3.Diazoxide and dimethyl sulphoxide prevent cerebral hypoperfusion-related learning dysfunction and brain damage after carotid artery occlusion.
总之，通过这次实验，看到了设vehicle组的重要性，同时对DMSO这类脂溶剂有了更深的认识，在使用它们作为药物溶剂时，要时刻想着它们在其中可能起的干扰作用！而我们的实验问题要如何解决也要再考虑一下。
不知道LY294002在DMSO中的溶解度有多少，如果可以的话，可以提高浓度，这样再加LY294002 的时候，DMSO的终浓度会小很多。我用的时候，一般保持DMSO终浓度<0.05%
nccunccu wrote:
不知道LY294002在DMSO中的溶解度有多少，如果可以的话，可以提高浓度，这样再加LY294002 的时候，DMSO的终浓度会小很多。我用的时候，一般保持DMSO终浓度<0.05%
sigma说明书上写的是：溶解度 DMSO: >5 mg/mL，但一直没弄明白是什么意思。
我想配成母液50mM，用时稀释成100uM，相当于稀释了500倍，如果LY终浓度按50uM算的话，DMSO终浓度0.1%。但我觉得还是有点高。想配的时候用50%的DMSO配，即1mg LY+66ul配制液（33ul DMSO+33ul PBS），但不知道能不能溶。
nccunccu是怎么配的呢，能使DMSO终浓度<0.05%？
olivial wrote:
sigma说明书上写的是：溶解度 DMSO: >5 mg/mL，但一直没弄明白是什么意思。
我想配成母液50mM，用时稀释成100uM，相当于稀释了500倍，如果LY终浓度按50uM算的话，DMSO终浓度0.1%。但我觉得还是有点高。想配的时候用50%的DMSO配，即1mg LY+66ul配制液（33ul DMSO+33ul PBS），但不知道能不能溶。
nccunccu是怎么配的呢，能使DMSO终浓度<0.05%？
我猜说明书的意思是LY在DMSO中最少可以溶解5mg/ml吧，我不知道LY的分子量，楼主可以换算成摩尔浓度看是多少
我用的东西和楼主的不一样，我配的是母液20mM,使用浓度为10uM,所以DMSO差不多为0.05%。
LY分子量307g/mol。
我们没有摸LY的终浓度，所以就按文献最大浓度50uM做了，如果LY的终浓度能降下来，DMSO的浓度自然也就降下来了，您用10uM浓度很小呢，不知能否阻断PI-3k的作用？
我们没有摸LY的终浓度，所以就按文献最大浓度50uM做了，如果LY的终浓度能降下来，DMSO的浓度自然也就降下来了，您用10uM浓度很小呢，不知能否阻断PI-3k的作用？
前几天才配的LY294002，具体的溶解方法为，以325µl DMSO溶解5mg干粉形式的ly294002即可得到50mM的储存液。刚开始溶的时侯我也担心能不能全部溶解，配完之后才发现担心有点多余，呵呵。用测细胞增殖的方法，摸了一下药物浓度，以0.1-0.3%的DMSO做vehicle control,发现与空白对照也没什么差异。仅供参考！
cell100 wrote:
前几天才配的LY294002，具体的溶解方法为，以325µl DMSO溶解5mg干粉形式的ly294002即可得到50mM的储存液。刚开始溶的时侯我也担心能不能全部溶解，配完之后才发现担心有点多余，呵呵。用测细胞增殖的方法，摸了一下药物浓度，以0.1-0.3%的DMSO做vehicle control,发现与空白对照也没什么差异。仅供参考！
谢谢cell100提的建议！
我们是用MTT检测的，0.1%DMSO确实和vehicle组没有差异，但DMSO和我们的干预药物有协同作用，所以想把DMSO的浓度尽量降到最低，若是162.5ul DMSO+162.5ul PBS（总体积325µl）溶解5mg干粉配成50mM贮存液，能溶吗？
olivial wrote:
LY分子量307g/mol。
我们没有摸LY的终浓度，所以就按文献最大浓度50uM做了，如果LY的终浓度能降下来，DMSO的浓度自然也就降下来了，您用10uM浓度很小呢，不知能否阻断PI-3k的作用？
抱歉可能误导楼主了，我用的药物不是为了阻断PI-3k，不过也是用DMSO溶解的，不好意思啦。
nccunccu wrote:
抱歉可能误导楼主了，我用的药物不是为了阻断PI-3k，不过也是用DMSO溶解的，不好意思啦。
没关系，大家共同学习，共同进步嘛！
很奇怪很多人总是用DMSO来作溶剂来做药理的实验。
不溶的化合物要用乳化剂、助悬剂或增溶剂来分散或溶解。乳化剂可用泊洛沙姆、助悬剂常用CMCNa，增溶剂可选用吐温８０或CO40。
用DMSO或甲醇溶解都是脱离现实的。DMSO倒是怎么说在外用制剂里面还是可以用一点的。甲醇是绝对不能用。如果一个化合物在氯仿中溶解度最好，是不是有人要用氯仿溶了去做药理实验呢？
为什么天朝的许多“新药”只能停留在细胞实验里，停留在动物实验里，停留在纸上。这就是原因。因为，做的实验都是不考虑今后这个化合物可能要应用于人体的情况。就是做个实验拿点数据发点文章而已。文章发完，科研就终结了。
不溶的化合物要用乳化剂、助悬剂或增溶剂来分散或溶解。乳化剂可用泊洛沙姆、助悬剂常用CMCNa，增溶剂可选用吐温８０或CO40。
用DMSO或甲醇溶解都是脱离现实的。DMSO倒是怎么说在外用制剂里面还是可以用一点的。甲醇是绝对不能用。如果一个化合物在氯仿中溶解度最好，是不是有人要用氯仿溶了去做药理实验呢？
为什么天朝的许多“新药”只能停留在细胞实验里，停留在动物实验里，停留在纸上。这就是原因。因为，做的实验都是不考虑今后这个化合物可能要应用于人体的情况。就是做个实验拿点数据发点文章而已。文章发完，科研就终结了。
tom88339 wrote:
很奇怪很多人总是用DMSO来作溶剂来做药理的实验。
不溶的化合物要用乳化剂、助悬剂或增溶剂来分散或溶解。乳化剂可用泊洛沙姆、助悬剂常用CMCNa，增溶剂可选用吐温８０或CO40。
用DMSO或甲醇溶解都是脱离现实的。DMSO倒是怎么说在外用制剂里面还是可以用一点的。甲醇是绝对不能用。如果一个化合物在氯仿中溶解度最好，是不是有人要用氯仿溶了去做药理实验呢？
为什么天朝的许多“新药”只能停留在细胞实验里，停留在动物实验里，停留在纸上。这就是原因。因为，做的实验都是不考虑今后这个化合物可能要应用于人体的情况。就是做个实验拿点数据发点文章而已。文章发完，科研就终结了。
科研要与临床相联系这确实没错，否则科研就真的失去了它的意义，科学研究者也就真的只是科学研究者了。但当我们想证明一种药有效时，总要使用它的拮抗剂或抑制剂去反复证明，LY就是其中之一，而这些保护药的拮抗剂或抑制剂当然是不会用于人身上的，要不然细胞实验和动物实验还有什么意义呢？
tom88339 wrote:
很奇怪很多人总是用DMSO来作溶剂来做药理的实验。
不溶的化合物要用乳化剂、助悬剂或增溶剂来分散或溶解。乳化剂可用泊洛沙姆、助悬剂常用CMCNa，增溶剂可选用吐温８０或CO40。
用DMSO或甲醇溶解都是脱离现实的。DMSO倒是怎么说在外用制剂里面还是可以用一点的。甲醇是绝对不能用。如果一个化合物在氯仿中溶解度最好，是不是有人要用氯仿溶了去做药理实验呢？
为什么天朝的许多“新药”只能停留在细胞实验里，停留在动物实验里，停留在纸上。这就是原因。因为，做的实验都是不考虑今后这个化合物可能要应用于人体的情况。就是做个实验拿点数据发点文章而已。文章发完，科研就终结了。
在生物学实验中，大家基本上都是用DMSO作为溶剂来溶解化合物的，一方面DMSO号称万能溶媒，基本上我们使用的化合物都能溶解；另一方面DMSO对细胞的毒性很小。我想你说的那些乳化剂，助悬剂等研究药剂学的人可能会用到。
天朝的新药停留在实验阶段不是说不考虑化合物应用于人体的情况，肯定考虑了，因为经济利益在那里，谁不想开发个新药？http://www.sibcb.ac.cn/cpRecentRes-1.asp?id=1140
国外的做前期基础开发的也是这么做的，只有到一定程度，有苗头才会进行继续开发，上临床试验，剂型研究等等。
我也遇到过olivial 相同的问题啊！！！在做ERK信号通路时，就遇到了，谢谢前辈ylhuang0502的解答啊！！！
shutaozheng_824 wrote:
我也遇到过olivial 相同的问题啊！！！在做ERK信号通路时，就遇到了，谢谢前辈ylhuang0502的解答啊！！！
期待着回复？！
shutaozheng_824 wrote:
我也遇到过olivial 相同的问题啊！！！在做ERK信号通路时，就遇到了，谢谢前辈ylhuang0502的解答啊！！！
那你们后来是怎么解决的呢？
且听下回分解～
那请问各位 需要不需要过滤呢
肯定是在外边称取药物的啊
但是DMSO如何过滤呢
请教各位
肯定是在外边称取药物的啊
但是DMSO如何过滤呢
请教各位
zkyang wrote:
那请问各位 需要不需要过滤呢
肯定是在外边称取药物的啊
但是DMSO如何过滤呢
请教各位
用DMSO溶解药物后不需要过滤除菌，因为DMSO有毒，本身不可能染菌的。
请问你们现在用的LY浓度是多少啊？我师姐说50um有点大，我用的是HepG2细胞，请各位大神指教
请问楼主，您现在的LY294002是怎么配置的呢？终浓度是多少？我现在买的sigma的LY，不知道怎么配置？
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师兄微信号：shixiongcoming
