【求助】怎样验证：某个microRNA可以抑制某个基因，并且这个基因又反过来调控这个microRNA

我想验证一个microRNA可以抑制某个基因，并且这个基因又反过来调控这个microRNA ，请问通过什么实验手段才能验证呢？

敲除？？？？

过表达？？？

我想问一下大家，首先这种情况可能发生吗？

这种调控机制属于反馈抑制或反馈激活回路/loop，非常常见。
具体研究方法可以参考一下最经典的p53和mdm2反馈抑制回路，有很多这方面的文献。

为什么不可能发生呢？
既然认为它不可能发生，为什么还要验证呢？

验证microRNA的靶基因： 在目的基因上面寻找该microRNA的理论seed sequence， 然后克隆入psiCHECK2-Dual luciferase reporter vector,购买该microRNA的precursor（Gain of function)和Inhibitors（Loss of function),与构建的载体共同转染细胞系（根据你的情况选择，还要考虑不同细胞系中的该microRNA的本底表达）。然后根据luciferase的比值变化确定是否可以调节该基因。如果有用需要合成突变的seed sequence，看看该作用是否消失（是否特异性作用）。
验证基因对于microRNA的调控作用：如果可以直接获得重组蛋白，那么可以直接作用于该microRNA阳性细胞系，然后检测其水平变化；如果该基因的信号通路很明确，也可以通过在细胞系中调节该通路来检测microRNA的变化。
自己的一些粗浅看法，仅供参考！

表达调控方面的研究，随研究目的不同，方法也不同；你可以使用报告基因系统，就像上面“知足常樂”的帖子所介绍的那样，测定转录强度，也可以通过realtime、WB等手段检测转录后水平、翻译水平乃至翻译后水平的调控现象。

你好，请问microRNA名称后的是什么意思?如miR-146undefined.是否是miR-146a的互补序列?谢谢

第一次回复:)参照以前的帖子回答。

关于microRNA的命名规则：
(1)miRNA 简写成miR，再根据其被克隆的先后顺序加上阿拉伯数字，如miR-21；
(2)高度同源的miRNA 在数字后加上英文小写字母(a、b 、c)，如miR-199a 和miR-199b；
(3)由不同染色体上的DNA序列转录加工而成的具有相同成熟体序列的miRNA，则在后面加上阿拉伯数字以区分, 如miR-199a-1 和miR-199a-2；
(4)如果一个前体的2 个臂分别加工产生miRNA，则根据克隆实验，在表达水平较低的miRNA 后面加“”，如miR-199a和miR-199undefined，或进行如下命名，miR-142-5p(也可命名为miR-142-s，表示从5' 端的臂加工而来)和miR-142-3p(也可命名为miR-142-as，表示从3´端的臂加工而来)；
(5)将物种缩写置于miRNA 之前，如hsa-miR-1 9 5 ；
（6）确定命名规则之前发现的miRNA，如let-7，则保留原来名字。
引自周凡，庄诗美.《microRNA与肿瘤》, 生命科学, 2008, 20(2):207-212.

感谢sherry_fx的解说.

我想请问那个microRNA阳性细胞系是指稳转miRNA的细胞系吗？